廣州億濤生物科技公司(ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY),由中山大學生命科學領域專業人士和業內專業營銷人才共同組建成立。“持續改善動物及人類健康”是公司的愿景,自成立以來一直潛心研究、注重細節,專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前,ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域,涉及NGS伴隨診斷行業、畜牧行業、水產養殖業、高校科研等行業。
5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液粉末使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8162 5×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L/pack 1/5/10/100包 使用說明書 1份 【保存條件】 室溫保存,有效期2年;配成溶液后不宜超過一個月。 【概述】 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。 【組分濃度】 125mM Tris, 1.25M Glycine, 0.5%(W/V)SDS 【使用建議】 1. 取一包可以配制1升SDS-PAGE電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約900毫升,溶解。然后在量筒中定容到1升。混勻后即為5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。 2. 使用前請取100ml 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液加入400ml蒸餾水或去離子水(5倍稀釋),混勻后即為1×工作液,可直接使用。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用1-2次,但為了取得最佳的電泳效果,應使用沒有使用過的電泳液。 3. 本電泳液含有SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性PAGE電泳液。
5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液粉末使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8162 5×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L/pack 1/5/10/100包 使用說明書 1份 【保存條件】 室溫保存,有效期2年;配成溶液后不宜超過一個月。 【概述】 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。 【組分濃度】 125mM Tris, 1.25M Glycine, 0.5%(W/V)SDS 【使用建議】 1. 取一包可以配制1升SDS-PAGE電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約900毫升,溶解。然后在量筒中定容到1升。混勻后即為5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。 2. 使用前請取100ml 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液加入400ml蒸餾水或去離子水(5倍稀釋),混勻后即為1×工作液,可直接使用。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用1-2次,但為了取得最佳的電泳效果,應使用沒有使用過的電泳液。 3. 本電泳液含有SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性PAGE電泳液。
5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液粉末使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-81625×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L/pack1/5/10/100包 使用說明書1份【保存條件】室溫保存,有效期2年;配成溶液后不宜超過一個月。【概述】5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。【組分濃度】125mM Tris, 1.25M Glycine, 0.5%(W/V)SDS【使用建議】1. 取一包可以配制1升SDS-PAGE電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約900毫升,溶解。然后在量筒中定容到1升。混勻后即為5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。2. 使用前請取100ml 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液加入400ml蒸餾水或去離子水(5倍稀釋),混勻后即為1×工作液,可直接使用。【注意事項】1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用1-2次,但為了取得最佳的電泳效果,應使用沒有使用過的電泳液。3. 本電泳液含有SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性PAGE電泳液。
5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液粉末使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-81625×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L/pack1/5/10/100包 使用說明書1份【保存條件】室溫保存,有效期2年;配成溶液后不宜超過一個月。【概述】5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。【組分濃度】125mM Tris, 1.25M Glycine, 0.5%(W/V)SDS【使用建議】1. 取一包可以配制1升SDS-PAGE電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約900毫升,溶解。然后在量筒中定容到1升。混勻后即為5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液。2. 使用前請取100ml 5×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液加入400ml蒸餾水或去離子水(5倍稀釋),混勻后即為1×工作液,可直接使用。【注意事項】1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用1-2次,但為了取得最佳的電泳效果,應使用沒有使用過的電泳液。3. 本電泳液含有SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性PAGE電泳液。
1×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L×1pack【保存條件】 室溫保存,有效期 2 年;配成溶液后不宜超過一個月,如若污染,請重新配置新溶液。 【概述】 1×Tris-甘氨酸-SDS 電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE) 中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。 【組分濃度】 25mM Tris, 250mM Glycine, 0.1%(W/V)SDS 【使用建議】 取一包可以配制 1 升 SDS-PAGE 電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約 900 毫升,溶解。然后在量筒中定容到 1 升。混勻后即可使用。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用 1-2 次,但為了取得最佳的電泳效果,應使 用沒有使用過的電泳液。 3. 本電泳液含有 SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性 PAGE 電泳液
1×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L×1pack【保存條件】 室溫保存,有效期 2 年;配成溶液后不宜超過一個月,如若污染,請重新配置新溶液。 【概述】 1×Tris-甘氨酸-SDS 電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE) 中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。 【組分濃度】 25mM Tris, 250mM Glycine, 0.1%(W/V)SDS 【使用建議】 取一包可以配制 1 升 SDS-PAGE 電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約 900 毫升,溶解。然后在量筒中定容到 1 升。混勻后即可使用。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用 1-2 次,但為了取得最佳的電泳效果,應使 用沒有使用過的電泳液。 3. 本電泳液含有 SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性 PAGE 電泳液
1×Tris-Glycine-SDS Running Buffer,powder,1L×1pack【保存條件】 室溫保存,有效期 2 年;配成溶液后不宜超過一個月,如若污染,請重新配置新溶液。 【概述】 1×Tris-甘氨酸-SDS 電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品為粉劑,請配成溶液使用。 【組分濃度】 25mM Tris, 250mM Glycine, 0.1%(W/V)SDS 【使用建議】 取一包可以配制 1 升 SDS-PAGE 電泳液的粉劑,倒入到一潔凈的燒杯中,加入蒸餾水到約900 毫升,溶解。然后在量筒中定容到 1 升。混勻后即可使用。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 回收的電泳液可以作為外槽電泳液重復使用 1-2 次,但為了取得最佳的電泳效果,應使用沒有使用過的電泳液。 3. 本電泳液含有 SDS,適用于變性膠蛋白電泳。對于非變性蛋白電泳,推薦使用非變性PAGE 電泳液
10×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8160 Tris-Glycine-SDS Running Buffer,10× 500ml 使用說明書 1份 【保存條件】 室溫保存,有效期1年;4℃保存可以延長有效期。 【概述】 10×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品按常規方法配制而成,為10×濃縮液,便于儲存、操作簡便。 【使用建議】 本產品為10×濃縮液,臨用前按下述步驟稀釋: 取100ml 10×Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液加入900ml蒸餾水或去離子水(10倍稀釋),混勻后即可使用。 【注意事項】 1. 本產品為高倍濃縮液,環境溫度較低時可能會有結晶析出,可加熱助溶,待溶解完全后再進行稀釋使用;密封保存,防止污染。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Tris-Glycine-SDS Running Buffer,5×Concentrate【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 5×Tris-甘氨酸-SDS 電泳緩沖液是用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗(SDS-PAGE)中的緩沖試劑。本產品按常規方法配制而成,為 5×濃縮液,便于儲存、操作簡便。 【組分濃度】 125mM Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V)SDS 【使用建議】 本產品為 5×濃縮液,臨用前按下述步驟稀釋: 取 100ml 5×Tris-甘氨酸-SDS 電泳緩沖液加入 400ml 蒸餾水或去離子水(5 倍稀釋),混勻后即可使用。 【注意事項】 1. 本產品為高倍濃縮液,環境溫度較低時可能會有結晶析出,可加熱助溶,待溶解完全后再進行稀釋使用;密封保存,防止污染。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Native-PAGE loading buffer,4×【保存條件】 -20℃保存,有效期 1 年 【概述】 4×非變性蛋白上樣緩沖液中不含 SDS 及 DTT 或者β-巰基乙醇,適合于常規的非變性PAGE 蛋白樣品的電泳。內含溴酚藍作為電泳進度追蹤染料。 【使用建議】 1. 室溫解凍 4×非變性蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每 10μl 蛋白樣品加入 30μl 上樣緩沖液的比例(4 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后直接上樣電泳。 4. 通常電泳時藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。
SDS-PAGE Loading buffer,4×(with β-Mercaptoethanol)【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE 運行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動引起的 pH 變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS 還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 溴酚藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍 4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每 30μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(4 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。【注意事項】 1. β-巰基乙醇對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在 30kd 左右, 膠濃度為 12時,約在 20kd 左右,膠濃度為 15%時,大概在 10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。
2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8154 SDS-PAGE Loading buffer,2×(with DTT) 10ml/100ml 使用說明書 1份 【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年 【概述】 2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 溴酚藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每10μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。
4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-8153SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT)1ml/10ml/100ml 使用說明書1份【保存條件】建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年【概述】4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。【使用建議】1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。【注意事項】1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。
SDS lysis buffer【保存條件】 4℃保存,有效期 1 年。 【概述】 SDS 裂解液是一種較為強烈的細胞組織裂解液,可用于動物、植物的細胞或組織樣品,也可以用于真菌或細菌樣品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 【使用建議】 1.對于培養細胞樣品: a.取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM,或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 b.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 對于懸浮細胞: 離心收集細胞,輕輕渦旋或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 對于細菌或酵母: 對于 1ml 菌液或酵母液,離心去上清,如果有必要可以使用 PBS 洗滌一次,充分去除液體后,輕輕渦旋或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入 100-200μl 裂解液,輕輕渦旋或者彈擊管底以混勻,冰上裂解 2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果,細菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液進行裂解。 裂解液用量說明: 通常6孔板每孔細胞或者1ml的菌液或酵母液中的細菌和酵母量加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每100 萬動物細胞用 100μl 本產品裂解后獲得的上清,其蛋白濃度約為 2-4mg/ml,不同細胞所不同。c.充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和ChIP 等操作。2.對于組織樣品: a.把組織剪切成細小的碎片。 b.融解 SDS 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM,或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 c.按照每 20mg 組織加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。) d.用玻璃勻漿器勻漿,或使用組織研磨儀研磨,直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液進行裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 e.充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和ChIP 等操作。每 20mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200μl 本裂解液裂解后獲得的上清,其蛋白濃度約為 15-25mg/ml,不同狀態的不同組織有所不同。 f.如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器或研磨設備,缺點是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 本產品長時間低溫存放可能會出現沉淀,可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解混勻后即可正常使用。 3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 4. 該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
RIPA Lysis Buffer normal【保存條件】 -20℃保存,有效期 1 年,頻繁使用可放置 4℃保存。 【概述】 RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 和 ELISA 等。 RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為高強度、中強度、低強度三類。請根據不同需求選擇不同強度RIPA 裂解液。 【使用建議】 如發現 RIPA 有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。根據使用量,取每 1mlRIPA 加入 10ul PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現用現加)。 1. 樣品前處理: a) 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。 b) 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。 c) 對于組織樣品:把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。 2. 后處理:將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 本產品長時間低溫存放可能會出現沉淀,可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 為保證最佳的使用效果,請盡量避免過多的反復凍融,可分裝后使用。 4. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 5. RIPA 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如 NF-kappaB、p53 等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。 6. 該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途
ChIP-Seq Nuclear Lysis buffer【保存條件】 -20 ℃保存,有效期 12 個月 【概述】 本品適用于小片段(5-500bp)單鏈 DNA 的雜交反應,獲得更優質的雜交雙鏈 DNA 片段,如 shRNA、gRNA載體等構建。 【操作方法】 1. 收獲細胞核后,將細胞核重懸于 3-5 倍體積的冰冷的 ChIP-Seq 核裂解緩沖液中(5 倍體積取決于細胞核提取過程中細胞裂解液用量,如細胞裂解液用量為 100μl 則加入 500μl ChIP-Seq 核裂解液) 2. 將試管在冰上孵育 20 分鐘。 3.從每個樣品中取 5 μL 等分試樣,并用 15 μL TE 稀釋以用于分析凝膠確認。(注:將剩余保存在冰上或凍-20 ℃,直到需要為止。該樣品用于確認染色質在分離前是完整的。) 4. 將試管放入設定為 2°C 的超聲浴中, 調節水位,使管子剛好接觸杯墊的表面。。如用 Misonix 431A 對每個試管進行 300 μl 的超聲處理非常穩定,因此我們建議將較大的樣品分成多個試管進行超聲處理。將至少兩個和多達 8 個試管放入超聲儀的試管支架中。 5. 用 10 秒的脈沖和 10 秒的靜止時間以 20 的振幅對樣品進行超聲處理,總超聲時間為 30 分鐘。 6. 從超聲儀中取出樣品,并保存在冰上。 7. 取 5 μl 樣品,并用 15 μl TE 稀釋以用于分析凝膠。 8. 在 37°C 下,用 10 μg RNase A 樣品 15 分鐘。 9. 在 65°C 下用 20 μg 蛋白酶 K 樣品 30 分鐘。 10. 在 95°C 下反向交聯 5 分鐘,使樣品緩慢冷卻至室溫。需要執行這些步驟以確保 DNA 在瓊脂糖凝膠上的正確遷移。否則,將發生比預期高得多的分子量的涂污或遷移。 11. 將加樣染料添加到每個樣品中,并在 TAE 運行緩沖液中的 1%瓊脂糖凝膠上分離樣品。 12. 凝膠成像儀下觀察瓊脂糖凝膠上的 DNA 樣品。剪切染色質的大小應在 200 至 500 bp 之間。 13. 若步驟 12 完成后鑒定可行,將步驟 6 中其余樣品在 4°C 下以 16,000 g 的速度離心 10 分鐘,以去除不溶物。 14. 將可溶的剪切染色質轉移到新鮮的 1.5ml 離心管中。染色質可以在液氮中冷凍,并在-80°C 下保存直至需要。 15.按上述方法用 RNase A,蛋白酶 K 和交聯逆轉處理等分試樣(步驟 8-10)。 16.使用 QIAquick PCR 純化試劑盒純化染色質,并使用 NanoDrop 等測量 DNA 濃度。 【注意事項】 1. 如果每次的使用量很小,可以適當分裝后再使用,以免污染。 2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。