博奧森是國內(nèi)知名的品牌,其生產(chǎn)出來的各種產(chǎn)品都是高品質(zhì)的。提供全面的科研抗體、試劑,診斷抗體原料,以及CRO服務(wù)。現(xiàn)擁有近兩萬種抗體產(chǎn)品,涵蓋人蛋白靶點(diǎn)13000多個。特色產(chǎn)品有特異磷酸化抗體及專利授權(quán)AF熒光標(biāo)記抗體等。此外,公司還提供完善的單/多克隆抗體制備、標(biāo)記、重組蛋白、多肽合成及各項(xiàng)免疫學(xué)檢測技術(shù)服務(wù)等。
DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-750 bp) DNA Marker (100-750 bp)產(chǎn)品簡介:本產(chǎn)品為預(yù)混有1×上樣緩沖液的即用型的穩(wěn)定、清晰、精準(zhǔn)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),由7條線狀雙鏈DNA條帶組成,適用于對100-750bp的雙鏈DNA分子大小的估算和粗略定量。條帶組成:750bp(15ng/ul)、600 bp(12ng/ul)、500 bp(10ng/ul)、400 bp(8ng/ul)、300 bp(6ng/ul)、200 bp(8ng/ul)、100 bp(10ng/ul)。儲存液成分:10 mM TrisCl (pH 8.4),10 mM EDTA,0.02%溴酚蘭,5%甘油使用說明:1. 建議用于1.0~2.0%的瓊脂糖凝膠電泳,不推薦用于聚丙烯酰胺凝膠電泳;2. 電泳緩沖液可選用1xTAE 或0.5~1xTBE,電壓6~8v/cm膠長,電泳時間30~60分鐘;3. 根據(jù)上樣孔寬度,用滅菌槍頭吸取5~10ul本產(chǎn)品,加入上樣孔中;4. 加入待檢測DNA 樣品后開始電泳;5. 電泳結(jié)束后,使用溴化乙啶(EB)或其它DNA 染料染色并觀察電泳條帶。注意事項(xiàng):1. 經(jīng)檢測,本品室溫放置三個月帶型無變化;但建議低溫保存,以防因操作不慎導(dǎo)致核酸酶污染而引起條帶降解;2. 使用前請勿加熱;3. 當(dāng)電泳緩沖液緩沖能力下降時應(yīng)及時更換電泳緩沖液,以免影響分辨效果。
DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) (250-15000 bp) DNA Ladder (250-15000 bp)產(chǎn)品簡介:本產(chǎn)品為預(yù)混有1×上樣緩沖液的即用型DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),由7條線狀雙鏈DNA條帶組成,適用于對250-15000 bp的雙鏈DNA分子大小的估算和粗略定量。條帶組成:250、1000、2500、5000、7500、10000和15000 bp。其中2500 bp條帶濃度較大,為20 ng/μl,其余條帶濃度約為10 ng/μl。儲存液成分:10 mM TrisCl (pH 8.4),10 mM EDTA,0.02%溴酚蘭,5%甘油使用說明:1. 建議用于0.5~1.0%的瓊脂糖凝膠電泳,不推薦用于聚丙烯酰胺凝膠電泳;2. 電泳緩沖液可選用1x TAE 或0.5~1x TBE,電壓6~8 v/cm 膠長,電泳時間30~60分鐘;3. 根據(jù)上樣孔寬度,用滅菌槍頭吸取5ul本產(chǎn)品,加入上樣孔中;4. 加入待檢測DNA 樣品后開始電泳;5. 電泳結(jié)束后,使用溴化乙啶(EB)或其它DNA 染料染色并觀察電泳條帶。注意事項(xiàng):1. 經(jīng)檢測,本品室溫放置三個月帶型無變化;但建議低溫保存,以防因操作不慎導(dǎo)致核酸酶污染而引起條帶降解;2. 使用前請勿加熱;3. 當(dāng)電泳緩沖液緩沖能力下降時應(yīng)及時更換電泳緩沖液,以免影響分辨效果。
DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) (100-2000 bp) DNA Marker (100-2000 bp)產(chǎn)品簡介: 本產(chǎn)品為預(yù)混有1×上樣緩沖液的即用型的穩(wěn)定、清晰、精準(zhǔn)的DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn),由 7 條線狀雙鏈 DNA 條帶組成,適用于對 100~2000 bp 的雙鏈 DNA 分子大小的估算和粗略定量。條帶組成:100、250、500、750、1000、1500、2000bp。其中 750 bp 條帶濃度 最大,為 100 ng/5 μl,其余條帶濃度約為 50 ng/5 μl 。使用說明:1. 建議用于0.5~1.0%的瓊脂糖凝膠電泳,不推薦用于聚丙烯酰胺凝膠電泳;2. 電泳緩沖液可選用1x TAE 或0.5~1x TBE,電壓6~8 v/cm 膠長,電泳時間30~60分鐘;3. 根據(jù)上樣孔寬度,用滅菌槍頭吸取5~10ul本產(chǎn)品,加入上樣孔中;4. 加入待檢測DNA 樣品后開始電泳;5. 電泳結(jié)束后,使用溴化乙啶(EB)或其它DNA 染料染色并觀察電泳條帶。注意事項(xiàng):1. 經(jīng)檢測,本品室溫放置三個月帶型無變化;但建議低溫保存,以防因操作不慎導(dǎo)致核酸酶污染而引起條帶降解;2. 使用前請勿加熱;3. 當(dāng)電泳緩沖液緩沖能力下降時應(yīng)及時更換電泳緩沖液,以免影響分辨效果。 PCR Marker
別名:BSA-PBS solution (0.1%, sterile) PBS-BSA溶液(0.1%BSA,無菌)產(chǎn)品簡介:平衡鹽溶液(Balanced?Salt?Solution,BSS)與細(xì)胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓等環(huán)境狀態(tài)一致,具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量和無機(jī)鹽成分等作用,可滿足體外實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞生存并維持一定的代謝的基本需要。PBS-BSA溶液(0.1%BSA)主要由氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、BSA組成,不含Ca2+、Mg2+,pH值為7.4,該試劑經(jīng)過濾除菌,常用于細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞的洗滌或其他常規(guī)用途。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
PBS緩沖液 (含5%海藻糖, pH7.2) 1×PBS containing 5 % Trehalose別名:PBS containing 5 % Trehalose, pH7.2 磷酸鹽緩沖液(1×PBS,含5%海藻糖); 5%海藻糖PBS緩沖液; 5%海藻糖磷酸鹽緩沖液;產(chǎn)品簡介:本產(chǎn)品為磷酸鹽緩沖液(1×PBS)含5%海藻糖,由中性磷酸鹽緩沖液與高純度的海藻糖配制而成,pH: 7.2,海藻糖含量為5%(W/V),是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用緩沖液。本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
中性組織細(xì)胞固定液 (10%,NBF) Neutral buffered Formalin,10%別名:10% NBF; 固定液; 組織固定液; 組織細(xì)胞固定液; 10%福爾馬林中性固定液;產(chǎn)品簡介:固定的目的在于保存細(xì)胞和組織的原有形態(tài)結(jié)構(gòu),固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對自身組織和細(xì)胞的自溶、抑制細(xì)菌和霉菌的生長。固定劑通過凝固、生成添加化合物等使蛋白質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而使酶失活。固定劑對細(xì)胞核細(xì)胞外成分發(fā)生物理改變。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。中性組織細(xì)胞固定液 (10%,NBF),更有利于保護(hù)超微結(jié)構(gòu)。該法為Carson改良法,主要由甲醛、磷酸鹽等組成,其福爾馬林含量為10%。使用方法:1. 一般標(biāo)本固定時間控制在 1~4h/mm,大標(biāo)本應(yīng)適當(dāng)延長固定時間。2. 固定好的組織,可在中性組織細(xì)胞固定液 (10%,NBF)或 70%乙醇中長期保存。注意事項(xiàng):1. 該固定液有一定刺激性和腐蝕性,請在通風(fēng)較好的環(huán)境下小心操作,避免吸入。2. 固定液 pH 最好接近用中性,pH 范圍 6~8。3. 組織取材的厚度不同,固定時間也不同。常規(guī)活檢組織比較適合的厚度為 2~4mm, 一般不超過 6mm。對組織恰當(dāng)?shù)倪x材有利于固定液的滲透。4. 固定液的容量應(yīng)足夠,一般固定液與組織塊的體積比率應(yīng)大于 10:1。如果容積不夠 大,可以在固定期間更換 1~3 次固定液。5. 溫度對固定的影響很明顯,提高溫度可以加速固定作用,但溫度不宜過高。6. 取出新鮮組織后,應(yīng)及時固定,無法及時固定時,應(yīng)保存于生理鹽水中及時送檢。7. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
RIPA裂解液(強(qiáng)) RIPA Lysis buffer (strong)別名:RIPA buffer(high); RIPA buffer(strong); RIPA buffer; lysis buffer; 蛋白提取試劑盒; 高效組織細(xì)胞裂解液; 高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞); 蛋白裂解液(組織/細(xì)胞);產(chǎn)品簡介:RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的 Western、IP 等實(shí)驗(yàn)。蛋白樣品可用BCA Protein Assay Kit (C05-02001) 測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去污劑,不能用Bradford法測定RIPA裂解后的蛋白濃度。RIPA 裂解液種類很多,根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度不同為強(qiáng)、中、弱三類。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果請根據(jù)檢測樣本與檢測目的的不同選擇適當(dāng)?shù)牧呀庖骸U垍⒖几郊?小助手):各種裂解液的主要特點(diǎn)和差異。RIPA裂解液(強(qiáng))(Powerful?RIPA?Lysis?Buffer)主要由50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS、EDTA 等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,維持原有的蛋白間相互作用。含有PMSF(100mM, 100×)一支。本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
硫酸魚精蛋白溶液(10%) Protamine sulfate solution (10%)產(chǎn)品簡介:硫酸魚精蛋白(Protamine?Sulfate)是從魚類新鮮成熟精子中提取的一種堿性蛋白質(zhì)的硫酸鹽,具有強(qiáng)堿性基團(tuán),在生物體內(nèi)可與強(qiáng)酸性的肝素結(jié)合,形成穩(wěn)定的復(fù)合物,從而使肝素失去抗凝能力。此溶液為10%硫酸魚精蛋白溶液。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
美國通用Rehydragel@LV鋁佐劑 Rehydragel@LV Alum Adjuvant產(chǎn)品簡介:Rehydragel?吸附劑氫氧化鋁凝膠作為獸醫(yī)疫苗的輔劑使用已有多年,在人類生物領(lǐng)域的重要性也日益增長。這些高純度氫氧化鋁凝膠在作為獸醫(yī)抗毒素的基體或載體使用時,可產(chǎn)生高度的蛋白吸附能力。Rehydragel輔劑以礦物學(xué)上稱為勃姆石的結(jié)晶狀羥基氫氧化鋁為基礎(chǔ)。當(dāng)需要結(jié)合帶負(fù)電的蛋白時,它們在疫苗中是非常有效的。在生理pH值(7.4)和9至12的零電荷點(diǎn)時它們帶一個正電荷。它們是含有大表面積(約525m2/g)結(jié)晶顆粒的水合凝膠。它們的AI2O3 含量范圍為2%至10%。 Rehydragel 系列包括AI2O3濃度很高的經(jīng)濟(jì)型產(chǎn)品,以及高度專門化產(chǎn)品。
50×TAE 緩沖液 50×TAE Buffer別名:Tris-acetic acid buffer (50×TAE); Tris-acetic acid buffer (50*TAE); TAE Buffer,50×; 電泳用Tris-乙酸(TAE, 50X); Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE);產(chǎn)品簡介:Tris-乙酸電泳緩沖液即Tris?acetate-EDTA?buffer,簡稱TAE。1×TAE工作液中含有40mM?Tris-acetate、1mM?EDTA(pH8.0)。TAE是常用的DNA電泳緩沖液,?本試劑是50倍濃縮的TAE,主要由2M?Tris-acetate,50mM?EDTA組成,使用時需用蒸餾水或去離子水稀釋50倍后使用。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
1M二硫蘇糖醇(DTT)溶液 1M DTT solution 別名:DTT溶液(1mol/L,RNase free); DTT溶液(1mol/L);產(chǎn)品簡介:二硫蘇糖醇簡稱DTT,CAS:27565-41-9,分子式為C4H10O2S2,分子量:154.2。DTT與巰基乙醇作用相似,是巰基化DNA的還原劑和去保護(hù)劑,以用于還原蛋白質(zhì)中二硫鍵,有抗氧化作用。DTT的刺激性氣味和毒性比巰基乙醇低很多。DTT溶液(1mol/L, RNase?free)主要由DTT、乙酸鈉、DEPC處理水等組成,過濾除菌。蛋白質(zhì)巰基還原實(shí)驗(yàn)DTT的常用工作濃度是1-10 mM。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
6×DNA電泳上樣緩沖液 6×DNA Loading Buffer本產(chǎn)品由甘油、溴酚藍(lán)指示劑以及DNA穩(wěn)定劑按一定比例混合而成,經(jīng)去核酸酶處理,適用于DNA樣品的電泳檢測,也可用于RNA樣品的非變性電泳檢測。使用前將適量本產(chǎn)品與核酸樣品和滅菌蒸餾水(或1×DNA電泳緩沖液)混合,稀釋到1×水平,即可加樣進(jìn)行電泳。
硫酸慶大霉素溶液 (50mg/ml) Gentamycin Sulfate (50mg/ml)慶大霉素(Gentamicin)是一種中國科學(xué)家王岳發(fā)明的的具有很好熱穩(wěn)定的氨基糖苷類抗生素。慶大霉素作用原理在于與細(xì)菌核糖體亞基的L6蛋白結(jié)合,抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。?慶大霉素是為數(shù)不多的具有很好熱穩(wěn)定的抗生素,因而廣泛應(yīng)用于生物科研領(lǐng)域的培養(yǎng)基配制。Gentamicin?solution (50mg/ml) 經(jīng)過濾除菌,一般工作濃度為50~200ug/ml。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
氯霉素溶液 (34mg/ml) Chloramphenicol (34mg/ml)產(chǎn)品簡介:氯霉素(Chloramphenicol)是由大David?Gottlieb從Streptomyces?venezuelae分離出來的抑菌性廣譜抗生素。氯霉素的抑菌原理在于能阻斷細(xì)菌核糖體50s亞基的肽酰轉(zhuǎn)移酶從而抑制翻譯,高濃度下能抑制真核DNA的合成,從而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)生物合成。臨床上,主要用于治療多種細(xì)菌感染,尤其適用于革蘭氏陰性菌。臨床上,氯霉素是治療傷寒、副傷寒、細(xì)菌性結(jié)膜炎的有效藥物,但因易導(dǎo)致造血系統(tǒng)的不良反應(yīng),應(yīng)用大大受到限制。Chloramphenicol?solution (34mg/ml) 在分子生物學(xué)中可以作為氯霉素抗性基因的篩選藥物。 本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
苯唑西林溶液 (64mg/ml) Oxacilli (64mg/ml)產(chǎn)品介紹:苯唑西林(Oxacillin)是一種青霉素類抗生素,為耐青霉素酶青霉素,其抗菌作用方式與青霉素相仿。苯唑西林對產(chǎn)青霉素酶葡萄球菌具有良好抗菌活性,對各種鏈球菌及不產(chǎn)青霉素酶的葡萄球菌抗菌活性則遜于青霉素G。苯唑西林通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成而發(fā)揮殺菌作用。苯唑西林時常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中,如用于配制含苯唑西林的LB培養(yǎng)基或LB平板等。 苯唑西林溶液(Oxacillin,64mg/ml) 為無菌溶液,一般工作濃度為0.4~6.4μg/ml,主要用于抗青霉素酶葡萄球菌的培養(yǎng)。?本產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷。
羅丹明123溶液(0.5mg/ml)Rhodamine123 Solution(0.5mg/ml)Rhodamine123是一種可以通過細(xì)胞膜的選擇性染色活細(xì)胞線粒體的熒光染料,呈黃綠色熒光,多用于檢測線粒體膜電位,也常用于細(xì)胞凋亡檢測。它可以快速通過細(xì)胞膜,僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲,并且對細(xì)胞沒有任何毒性。Rhodamine123還用于對許多種細(xì)胞進(jìn)行染色,包括植物細(xì)胞和細(xì)菌,由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與Rh123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性,因此Rh123也被用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。 本產(chǎn)品僅用于科研,不宜用于臨床診斷或其他用途。
青鏈霉素混合液/雙抗 (100×)Penicillin-Streptomycin Mixed solution (100×)別名:Penicillin/Streptomycin, 100X, Tissue Culture Grade - Calbiochem; Penicllin G Sodium Salt; Streptomycin Sulfate; Penicillin-Streptomycin Liquid; Penicillin-Streptomycin Solution, 100×; Penicillin/Streptomycin Mixed Liquid; Penicillin-Streptomycin Solution, 100X; 青/鏈霉素混合液(100×)細(xì)胞培養(yǎng)專用; (100×)雙抗; 雙抗; 青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗); 青霉素/鏈霉素溶液(100×雙抗);產(chǎn)品簡介:青鏈霉素混合液(100×) Penicillin-Streptomycin Mixed solution (100×),熟稱雙抗,專用于細(xì)胞培養(yǎng),用于預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)被細(xì)菌污染,特別是革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌的污染。產(chǎn)品經(jīng)過濾除菌處理,可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液中,此溶液為(100×)濃縮液,建議工作濃度:青霉素:100U/ml, 鏈霉素: 0.1mg/ml,即按1:100備稀釋使用即可。
別名: DMEM高糖培養(yǎng)基(含L-丙氨酰- L-谷氨酰胺,含丙酮酸鈉,不含HEPES);DMEM, high glucose, pyruvate; Mammalian Cell Culture;產(chǎn)品簡介:培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及生長素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素、色素、激素和血清。DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時又分為高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。產(chǎn)品性質(zhì):高糖,含4,500 mg/L D-葡萄糖, 4mM L-丙氨酰- L-谷氨酰胺和110mg/L 丙酮酸鈉相關(guān)產(chǎn)品:C7072,青霉素-鏈霉素溶液(100×雙抗);C7074,胎牛血清(基礎(chǔ));C7075,胎牛血清(單抗制備專用);C7076,DMEM高糖培養(yǎng)基;C7077,RPMI1640培養(yǎng)基;C7078,胰蛋白酶(牛胰)(BR,1:250);C7079,PEG1450溶液(50%,無菌)(進(jìn)口) ;
AbFluor? 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(微絲綠色熒光探針)Phalloidin/AbFluor? 488 (Green)別名: Phalloidin AbFluor? 488-Conjugated; Phalloidin/AF488; 鬼筆環(huán)肽AbFluor? 488偶聯(lián)物; 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色);產(chǎn)品描述:鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動蛋白F-actin,而不會與單體肌動蛋白G-actin結(jié)合,通常用來標(biāo)記組織切片,細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系中的F-actin,從而對F-actin進(jìn)行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無論是動植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結(jié)合,且非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白(Actin)抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標(biāo)記肌動蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。本品為AbFluor 488標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性;且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛。工作液配制:本品為 20μM 儲存液,300T總量為 300μL。按照 100 nM 的工作液濃度來換算,可制備總量為 60 mL 的工作液。建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量分裝保存,-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)前,用1×PBS稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦稀釋比例為:1:40-1:200,一個單位(T)相當(dāng)于200ul總?cè)旧w積中加入1-5ul儲存液,工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。最佳稀釋比例可以根據(jù)實(shí)際染色效果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。染色步驟:1. 細(xì)胞爬片生長 24h,使其密度達(dá)到 50%匯合度。2. 吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的 1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞 2 次。3. 使用4%甲醛PBS溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,冰上固定 10min。注:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動蛋白。4. 室溫條件下,用 PBS 清洗細(xì)胞 2~3 次,每次 10min。5. 室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化處理10min。6. 室溫條件下,用 PBS 清洗細(xì)胞 2~3 次,每次 10min。7. 取 200μl 配制好的 AbFluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞,室溫避光孵育 20min(通常情況下,4℃~37℃ 孵育皆可)。注:為了降低背景,可于 AbFluor 488 標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液內(nèi)加入 1% BSA;另外,孵育過程中為了避免溶液揮發(fā),可將蓋玻片轉(zhuǎn)移到一個密封的容器內(nèi)。8. 用 PBS 清洗蓋玻片 3 次,每次 5min。9. 用 200μl DAPI 溶液(濃度:100 nM)對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,約 30s。10. 用 PBS 清洗蓋玻片,然后倒置在已經(jīng)滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑,然后用指甲油永久封片。此法制備的標(biāo)本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 個月內(nèi)可繼續(xù)做 F-actin 染色分析。注:也可以直接使用含有 DAPI 的抗熒光淬滅封片劑合并步驟 9. 10。11. 熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,AbFluor 488(Ex/Em=495/519nm),DAPI(Ex/Em=364/454nm)。注意事項(xiàng):1. 鬼筆環(huán)肽具有毒性,需小心操作(對人的半數(shù)致死劑量 LD50 約 2mg/kg)。2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
去氫抗壞血酸 Dehydroascorbic acid別名:DHA; L-Dehydro Ascorbic Acid; 脫氫抗壞血酸(DHA)基本信息:級別:BRCAS號:490-83-5分子式:C6H6O6分子量:174.11MDL:MFCD00066467外觀/性狀:白色固體純度:96%溶解性:溶于水、甲醇、乙醇,不溶于苯、氯仿。敏感性:吸濕性強(qiáng),吸收2分子水可得:二水合物。