廣州億濤生物科技公司(ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY),由中山大學生命科學領域專業(yè)人士和業(yè)內專業(yè)營銷人才共同組建成立?!俺掷m(xù)改善動物及人類健康”是公司的愿景,自成立以來一直潛心研究、注重細節(jié),專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前,ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域,涉及NGS伴隨診斷行業(yè)、畜牧行業(yè)、水產養(yǎng)殖業(yè)、高??蒲械刃袠I(yè)。
【包裝規(guī)格】產品編號 產品名稱 包裝 ES-8715 SuperBlot Protein-free Rapid Blocking Buffer(5×) 100ml/500ml 使用說明書 1份 【保存條件】常溫運輸,2-8°C保存12個月【產品特點】l快速高效:5~10 min快速完成封閉;只結合封閉轉印膜而不結合蛋白,因此不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,與傳統(tǒng)的脫脂奶粉和BSA封閉相比信噪比更高;l性能可靠:無蛋白配方,與抗體無交叉反應;l應用范圍廣:無磷酸化蛋白,無生物素,尤其適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統(tǒng),包括Western Blot及Elisa檢測;l增強抗體效果:使用本封閉液后,所需的最適抗體濃度低于常規(guī)使用濃度,可大大節(jié)省抗體使用量。【概述】本品專為快速高效封閉Western Blot轉印膜及Elisa檢測而設計,采用無蛋白配方,避免抗體與封閉劑的非特異結合,可最大程度地降低背景。同時,本封閉劑無內源的磷酸化蛋白及生物素,對磷酸化特異抗體及生物素檢測也不會產生干擾。本封閉劑不與蛋白產生非特異性結合,因而只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,大大提高了抗體檢測靈敏度。實驗表明本封閉劑對許多抗體都有不同程度的信號增強作用。然而這種信號增強作用因抗體而異,對某一特定抗體,并不一定具有確定的信號增強作用?!臼褂媒ㄗh】1.完成轉膜后,將轉印膜放入到雜交孵育盒中,加入10~20 mL TBS/T 或PBS/T;2.往TBS/T或PBS/T中加入1/4體積的無蛋白快速封閉液,置于搖床輕輕搖動,室溫封閉約10min(即 配即用); 注意:使用本品通常封閉5~15min均可;經多種抗體的測試封閉10min的效果顯著優(yōu)于常規(guī)的BSA 封閉1 h。對于一些背景非常高的抗體,可以嘗試將封閉時間延長為30~60 min。如有特殊需要也可4°C封閉過夜。3.封閉后的膜即可用于一抗孵育等后續(xù)實驗?!咀⒁馐马棥?.注意: 沒有任何一種封閉劑能適合所有抗原和抗體檢測系統(tǒng)。如出現(xiàn)本試劑不適合的抗體,請?zhí)鎿Q使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等;2.本品僅用于科研用途,不得用于臨床或診斷相關研究;3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
【操作方法】1. 對于貼壁細胞(以下均以6孔板為例,其它培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板請根據相應面積換算):a.將細胞培養(yǎng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板內,通常在鋪板后1-2天內長到70-90%。 b. 在轉染前1-2小時,吸去細胞培養(yǎng)液,更換為新鮮的不含抗生素的完全培養(yǎng)液2ml。c. 取2-4μg待轉染的質粒DNA (質??傮w積不宜超過20μl,若有多種質粒請混勻),以質量體積比1:3加入轉染試劑6~12μl(如2μg待轉染的質粒DNA加入轉染試劑6μl)。d.混勻后,室溫孵育3-5分鐘。e. 把DNA-轉染試劑混合物中加入500μl opti-MEM(若無opti-MEM可使用無血清無雙抗的DMEM或1640,具體根據轉染細胞使用的培養(yǎng)基),充分混勻后靜置10-15分鐘。 f.后均勻滴加到整個6孔板內(加入前吸出原培養(yǎng)板中500μl培養(yǎng)基),并置于含5%二氧化碳的37oC細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。 g. 在轉染后4-6小時左右換液,更換為2ml新鮮的完全培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。h.通常在轉染約24-48小時后就可以檢測到轉染基因的表達。2. 對于懸浮細胞: a. 離心收集懸浮細胞,用PBS洗滌一次。 b. 按照上面的步驟c)、d)、e)制備DNA-轉染試劑-optiMEM混合物。c. 每106個細胞的沉淀,用500微升DNA-轉染試劑-optiMEM混合物重新懸浮,室溫放置15-20分鐘。 d. 在一個6孔板孔內加入1.5ml完全培養(yǎng)液,然后加入來自上一步的細胞-500微升DNA-轉染試劑-optiMEM混合物,混勻。e. 在含5%二氧化碳的37oC細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。 f. 根據實驗要求和轉染試劑對于不同細胞的毒性不同,在4-6小時后離心收集細胞,用PBS洗一次,然后用2毫升完全培養(yǎng) 液重新懸浮細胞,繼續(xù)培養(yǎng)。 g. 通常在轉染約24-48小時后就可以檢測到轉染基因的表達。
功能與使用方法與life品牌的Trizol LS相似 【保存條件】2-8℃長期保存【操作方法】I. 樣本處理1. 組織樣本處理:用勻漿器或其他類似設備勻化組織樣本機械破壞裝置,每 500μL 最多使用 50 mg 組織NewZOL LS。 對于 DNA 含量高的組織(例如脾臟),建議使用 25 mg 組織/ 500μL 試劑。 2. 貼壁細胞樣本處理:除去細胞培養(yǎng)基,通過向培養(yǎng)皿(直徑 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通過反復吸移來確保完全裂解。(根據培養(yǎng)皿面積而不是細胞數計算試劑量。試劑量不足將導致分離的 RNA 受到 DNA 污染。殘留的勻漿可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以備后用。) 3. 懸浮細胞樣本處理:沉淀細胞,并通過添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106個細胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打數次裂解細胞。(添加 NewZOL LS 之前請勿洗滌細胞,細胞洗滌可能會導致 RNA降解。) 4. 液體樣本處理:每 200μL 液體樣品中加入 500μL NewZOL LS 進行均質化和裂解。對于小于 200μL 的樣品體積,請?zhí)砑?500μLNewZOL LS 并加水至最終體積為 700μL。 5. 富含脂質樣本處理:如上所述均質化富含脂質的樣品。將樣品以 12,000×g 離心 5 分鐘。 離心后,樣品頂部會出現(xiàn)一層脂肪。用移液器吸頭尖端刺穿上層,然后將上清液轉移到新管中。 II. RNA 提取1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 無 RNase 的水至裂解液中。劇烈搖動樣品 15 秒鐘。在室溫下孵育 5 分鐘。(對于包含 50 mg 組織/ 500μL NewZOL LS 的樣品,建議在室溫下孵育 15 分鐘。) 2. 在室溫下以12,000×g離心樣品15分鐘。含有DNA,蛋白質和多糖的半固體沉淀物形成在試管底部。RNA仍溶解在上清液中。 3. 將 500μL 上清液轉移至新管中。 勿吸太干凈防止污染,在 DNA /蛋白質沉淀上方保留一小部分上清液。(含有 DNA,蛋白質和多糖的沉淀物占勻漿-水混合物總量的約 10%。)4. 加入等體積異丙醇,上下顛倒混勻以沉淀 RNA,在室溫下孵育樣品 10 分鐘。5. 將樣品以 12,000×g 離心 10 分鐘,除去并丟棄上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式獲得 RNA。對于脾臟樣品,RNA 在試管底部形成凝膠狀膜。用乙醇洗滌后,膜變得更可見。 6. 加入 500μL 75% 乙醇(無 RNase 水配制)洗滌,輕彈管底使沉淀懸浮,上下顛倒混勻。對于較大的試管,按比例添加 75% 乙醇溶液。 7. 將沉淀以 8,000×g 的速度離心 3 分鐘。移液去除沉淀中的乙醇,重復乙醇洗滌步驟一次。靜置 5-10 分鐘待乙醇揮發(fā),無需過份干燥成固體,干燥成固體的 RNA 沉淀不易溶解 8. 將 RNA 沉淀溶于無 RNase 的水中,在室溫下渦旋 3 分鐘,以實現(xiàn)有效溶解。將得到的 RNA 進行檢測或-65℃長期保存(若需更長時間保存請?zhí)砑舆m量 RNA Chill(ES-8520))。 【注意事項】1. RNA 酶污染注意事項:a. 提取過程用品均經過去 RNA 酶處理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小時 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水沖洗并高壓滅菌,吸頭及離心管類盡量使用一次性無酶吸頭及離心管 b. 佩戴手套及口罩及護目鏡:皮膚上常含有細菌和霉菌,可污染 RNA 制備,且同時是 RNA 酶來源,同時 New ZOL LS 對皮膚有一定毒性,建議佩戴手套及口罩及護目鏡。 c. 盡量于通風櫥內提取:避免吸入提取過程中有毒物質。2. 安全性問題:a. 本品在與皮膚接觸及吞咽有毒性,可導致燒傷。與皮膚接觸后,應立即用洗滌劑和大量水沖洗。如感到身體不適,應立即就醫(yī)
【保存條件】常溫運輸,2-8°C保存12個月【產品特點】l快速高效:5~10 min快速完成封閉;只結合封閉轉印膜而不結合蛋白,因此不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,與傳統(tǒng)的脫脂奶粉和BSA封閉相比信噪比更高;l性能可靠:無蛋白配方,與抗體無交叉反應;l應用范圍廣:無磷酸化蛋白,無生物素,尤其適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統(tǒng);l增強抗體效果:使用本封閉液后,所需的最適抗體濃度低于常規(guī)使用濃度,可大大節(jié)省抗體使用量?!靖攀觥勘酒穼榭焖俑咝Х忾]Western Blot轉印膜而設計,采用無蛋白配方,避免抗體與封閉劑的非特異結合,可最大程度地降低背景。同時,本封閉劑無內源的磷酸化蛋白及生物素,對磷酸化特異抗體及生物素檢測也不會產生干擾。本封閉劑不與蛋白產生非特異性結合,因而只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點,大大提高了抗體檢測靈敏度。實驗表明本封閉劑對許多抗體都有不同程度的信號增強作用。然而這種信號增強作用因抗體而異,對某一特定抗體,并不一定具有確定的信號增強作用。【使用建議】1.完成轉膜后,將轉印膜放入到雜交孵育盒中,根據膜的大小適量體積的快速封閉液,需完全浸沒覆蓋膜,對于7.5×8cm的膜推薦使用量5-10ml;2.置于搖床輕輕搖動,室溫封閉約10min;注意:使用本品通常封閉5~15min均可;經多種抗體的測試封閉10min的效果顯著優(yōu)于常規(guī)的BSA封閉1 h。對于一些背景非常高的抗體,可以嘗試將封閉時間延長為30~60 min。如有特殊需要,也可4°C封閉過夜。3.封閉后的膜即可用于一抗孵育等后續(xù)實驗?!咀⒁馐马棥?.注意: 沒有任何一種封閉劑能適合所有抗原和抗體檢測系統(tǒng)。如出現(xiàn)本試劑不適合的抗體,請?zhí)鎿Q使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等;2.本品僅用于科研用途,不得用于臨床或診斷相關研究;3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
【保存條件】室溫保存,一年有效【概述】甘油又名丙三醇,是一種無色、無臭、味甘的粘稠液體。 分子式:C3H8O3,分子量:92.094,CAS號:56-81-5。本產品純度高于99%,經無菌處理,使用時應稀釋至工作濃度。【注意事項】1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。3. 溶液為無菌溶液,使用時應盡量避免污染。
Lysis dilution buffer(150 mM NaCl/5 mM EDTA)500ml
TripleSelect無動物源常溫胰酶 【保存條件】 室溫保存12個月, 2–8°C或–20°C保存24個月【概述】 TripleSelect與胰蛋白酶一樣,可裂解賴氨酸和精氨酸C-末端上的肽鍵。但是,TripleSelect無與倫比的純度提高了特異性,其原因在于只有一種酶發(fā)揮作用。這減少了胰蛋白酶和其他提取物中存在的多種酶的裂解作用造成的損害?!井a品特點】 對細胞作用溫和:純度提高了特異性,其原因在于只有一種酶發(fā)揮作用。這減少了胰蛋白酶和其他提取物中由于多種酶切割造成的損害。在室溫下保持穩(wěn)定:在室溫或4°C下可保持穩(wěn)定12-24個月,因此易于儲存和處理、方便快捷。無動物來源蛋白:與常用豬胰蛋白酶不同,本試劑不含動物來源成分。無需終止,易于使用:無需使用胰蛋白酶抑制劑(如FBS)終止消化,PBS或DMEM等稀釋后自動失活。【使用建議】 1.使用前將TripleSelect和完整的生長培養(yǎng)基恢復至室溫。2.將待消化細胞培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)去除。3.使用DPBS(無鈣鎂)清洗細胞,清洗完去除DPBS液體。4.加入相應體積的TripleSelect消化液(如25cm2瓶中加入1-2ml TripleSelect消化液,75cm2瓶中加入5ml TripleSelect消化液)5.37°C孵育至細胞變圓脫落(鏡下觀察),可輕拍培養(yǎng)瓶/皿。6.加入5ml完全培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶/皿(體積根據不同面積培養(yǎng)瓶/皿),可輕輕吹打使細胞更好分離。7.將含細胞的液體移入15ml無菌離心管中。以200-500g轉速離心5-10分鐘使細胞沉淀。8.去除上清后,加入含血清的完全培養(yǎng)液使細胞沉淀重新懸浮,即可用于后續(xù)實驗【注意事項】 1. 注意無菌操作,盡量避免污染。2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。