【操作方法】

1. 對于貼壁細(xì)胞（以下均以6孔板為例，其它培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板請根據(jù)相應(yīng)面積換算）：

a.將細(xì)胞培養(yǎng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板內(nèi)，通常在鋪板后1-2天內(nèi)長到70-90%。

b. 在轉(zhuǎn)染前1-2小時，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，更換為新鮮的不含抗生素的完全培養(yǎng)液2ml。

c. 取2-4μg待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA (質(zhì)粒總體積不宜超過20μl，若有多種質(zhì)粒請混勻)，以質(zhì)量體積比1：3加入轉(zhuǎn)染試劑6~12μl（如2μg待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA加入轉(zhuǎn)染試劑6μl）。

d.混勻后，室溫孵育3-5分鐘。

e. 把DNA-轉(zhuǎn)染試劑混合物中加入500μl opti-MEM（若無opti-MEM可使用無血清無雙抗的DMEM或1640，具體根據(jù)轉(zhuǎn)染細(xì)胞使用的培養(yǎng)基）,充分混勻后靜置10-15分鐘。

f.后均勻滴加到整個6孔板內(nèi)（加入前吸出原培養(yǎng)板中500μl培養(yǎng)基），并置于含5%二氧化碳的37oC細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

g. 在轉(zhuǎn)染后4-6小時左右換液，更換為2ml新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

h.通常在轉(zhuǎn)染約24-48小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達(dá)。

2. 對于懸浮細(xì)胞：

a. 離心收集懸浮細(xì)胞，用PBS洗滌一次。

b. 按照上面的步驟c)、d)、e）制備DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM混合物。

c. 每106個細(xì)胞的沉淀，用500微升DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM混合物重新懸浮，室溫放置15-20分鐘。

d. 在一個6孔板孔內(nèi)加入1.5ml完全培養(yǎng)液，然后加入來自上一步的細(xì)胞-500微升DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM混合物，混勻。

e. 在含5%二氧化碳的37oC細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和轉(zhuǎn)染試劑對于不同細(xì)胞的毒性不同，在4-6小時后離心收集細(xì)胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培養(yǎng) 液重新懸浮細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)。

g. 通常在轉(zhuǎn)染約24-48小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達(dá)。