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NCM/新賽美
NCM/新賽美是一個非常優質的國產品牌
NCM/新賽美 快速重組無縫克隆試劑盒
基本售價：249.00元
產品介紹 EasyFusion Assembly Master Mix 是一種快速、簡單且高效的定向同源重組克隆試劑盒，可將目的片段一個或多個 （PCR 產物）定向克隆到任意載體的任意位置。該技術不依賴于 T4 連接酶、不受載體和目的片段的酶切位點限制， 僅需 15-30 分鐘實現高效無縫連接。 操作步驟 1.線性化載體準備 可以通過以下兩種方法獲得線性化載體，最終載體的濃度需>10 ng/μl。(高濃度的載體有利于提高效率)。 （1）選擇合適的酶切位點線性化載體。（單酶切或雙酶切均可， 5′端突出、3′端突出或平末端均適用） （2）以載體為模板，設計引物，通過 PCR 的方式擴增出需要的線性化載體 2.擴增插入片段引物設計 通常通過 PCR 獲得目的片段，引物設計要保證目的片段兩端有至少 15bp-20bp 序列與線性化載體的兩端一致的 同源序列。PCR 每條引物長度至少在 35-40bp 之間，包括 5′ 端和 3′端與線性載體同源的 15bp-20bp（不包括酶 切位點）以及目的片段特異性序列 20-25bp。 （1）單個片段的引物設計： 引物包含目的基因特異性序列和重疊序列 插入片段正向擴增引物設計方式為： 5′-上游載體末端 15-20bp 同源序列+目的基因特異性正向擴增引物序列(20-25bp)-3′ 插入片段反向擴增引物設計方式為： 5′-下游載體末端 15-20bp 同源序列+目的基因特異性正向擴增引物序列(20-25bp)-3′ 設計引物時，可以參考以下實例（以 pUC19 線性化載體為例）： 3.PCR 擴增插入片段 推薦使用高保真聚合酶進行 PCR 擴增插入片段，以減少擴增突變的產生，選擇聚合酶時無需考慮末端有無 A 加尾 發生（重組過程中將會被去除，在最終載體中不會出現）。PCR 擴增結束后，對目的 PCR 產物進行純化：若是擴增模 板與克隆載體抗性不同，且 PCR 產物條帶電泳單一，產物可以無需純化直接用于重組反應，或者對 PCR 產物進行脫鹽 等簡單純化；否則，需要進行瓊脂糖凝膠電泳回收特異性的目的 PCR 片段。 4.重組反應進行 取出 EasyFusion Assembly Master mix, 置于冰浴中，配制下圖應體系（如果不慎將液體粘在管壁，可通過短暫離心沉降） 注意：10 ul 反應體系中，載體和各插入片段建議量在 20-50ng 之間，載體與各插入片段的最佳摩爾比為 1:2-1:3 輕輕混勻反應體系，50℃反應 15-30 分鐘（對于多片段重組或大片段重組，建議反應時間 30 分鐘，可延長反應時 間至 1 小時）；待反應結束后，將離心管置于冰上冷卻數秒，之后將重組產物保存于-20℃或用于轉化。 5. 反應產物轉化、涂板及克隆鑒定 建議所使用的感受態細胞效率要達到> 5X 107 cfu/ug。轉化步驟按照不同菌種的要求進行或者按標準轉化操作 進行即可。菌落長出之后，建議采用菌落 PCR 進行陽性克隆鑒定，或者對樣品進行測序確保正確。 保存條件及組成成分 -20℃保存及冰袋運輸 組成成分：2X EasyFusion Assembly Master Mix , 125ul; Linearized pUC19 Vector (10ng/ul),5ul;Control Insert（0.5kb, 20ng/ul),5ul 注意事項 1. 線性化載體或目的片段的純化的品質及濃度等較差會顯著降低克隆陽性率及克隆數。 2. 重組質粒大小的增加（>12kb），克隆效率會顯著降低，選擇穩定性更好的感受態及轉化效率更高效的感受態細胞。 3. 菌落較少時，建議適當增加重組反應產物的體積量，或者提高轉化產物量等。 4. 隨著重組片段數目的增加，克隆效率降低，建議增加引物重疊序列長度或適當延長反應時間。
NCM/新賽美 細胞/組織總RNA快速提取試劑盒
基本售價：499.00元
產品介紹 本試劑盒可以快速從細胞、細菌和動物組織中提取總RNA。本產品中裂解液(RLT Lysis Bufer)可以快速裂解細胞和滅活RNA酶，通過DNA清除/RNA吸附通用柱吸附技術，去除基因組DNA殘留，同時在乙醇輔助結合條件下，高效地結合在吸附柱的硅膠膜上，再經過多次的洗滌離心后，去除細胞代謝物和蛋白質等雜質，獲得純凈的總RNA。純化的RNA可用于RT-PCR，NorthernBlotPoly(A)+篩選等多種實驗。 產品亮點 安全性高:無需使用苯酚，氯仿等試劑，無需乙醇沉淀 使用范圍廣:對細胞、細菌、動物組織提取均適用 操作簡單快速:全程室溫操作，10-20分鐘可完成純化步驟 提取純度高:經多次柱吸附和洗滌，基因組DNA和蛋白質污染低 首次使用前，在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入標簽指定量的無水乙醇（5 preps/50 preps分別加入 4.8 ml/48 ml 無水乙醇），充分混勻后使用，并做好標記。 *注意觀察各溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季低溫環境時），可 37℃溫浴復溶至溶液澄清，避免影響使用效果。 運輸和保存方式 常溫運輸，室溫避光保存，有效期 12 個月。2-4°C 可保存更長時間
NCM/新賽美 總RNA提取試劑
基本售價：399.00元
產品介紹 TRnaZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細胞中提取總 RNA 的一種廣譜型試劑。TRnaZol Reagent 內含優化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶，最大 限度地裂解樣品且同時保證 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 離心后，溶液會分成三層：上 層無色水相、中間層和下層紅色有機相，其中 RNA 分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便，顏 色分明，提取的總 RNA 完整性好，純度高，無蛋白和 DNA 的污染，可用于各種分子生物學實驗，如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 產品特色 ? 安全性高：使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ? 使用范圍廣：對人、動物、植物和細菌組織提取均適用 ? 顏色分明：溶液呈粉紅色，便于分離水相和有機相 ? 提取純度高：DNA 和蛋白質污染最低，可用于多種下游實驗 產品介紹 TRnaZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細胞中提取總 RNA 的一種廣譜型試劑。TRnaZol Reagent 內含優化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶，最大 限度地裂解樣品且同時保證 RNA 的完整性。加入 RNA Extraction Buffer 離心后，溶液會分成三層：上 層無色水相、中間層和下層紅色有機相，其中 RNA 分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便，顏 色分明，提取的總 RNA 完整性好，純度高，無蛋白和 DNA 的污染，可用于各種分子生物學實驗，如 RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern 等。 產品特色 ? 安全性高：使用 RNA Extraction Buffer 替代氯仿 ? 使用范圍廣：對人、動物、植物和細菌組織提取均適用 ? 顏色分明：溶液呈粉紅色，便于分離水相和有機相 ? 提取純度高：DNA 和蛋白質污染最低，可用于多種下游實驗 組成成分及保存條件
NCM/新賽美 蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液-500ml
基本售價：399.00元
產品介紹 NCM Western Blot Stripping Buffer（蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液）是新賽美生物生產的用于去除結合在印跡膜（PVDF膜或NC膜）上的一抗和二抗的洗滌液。該產品作用溫和，不含有毒有味的巰基乙醇，在不影響目的蛋白的情況下，可使同一張印跡膜進行多次抗體檢測。省去反復電泳和轉膜等步驟，節省樣品及時間，加快Western Blot檢測實驗。 產品特色 ? 獨有的配方，去除抗體效力強 ? 對蛋白作用溫和，不影響目的蛋白 ? 不含有巰基乙醇，無毒無味，室溫條件下使用保存 ? 適用PVDF膜和NC膜，加速抗體檢測 操作步驟 1. 將曝光結束的蛋白印跡膜充分浸入適當體積的NCM Western BlotStripping Buffer（蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液）中，抗體剝離液要充分覆蓋膜的表面，在脫色搖床上，室溫中速震蕩孵育10分鐘，棄去剝離液。 2. （可選）重復步驟1。（對于信號正常或較弱的印跡膜也可以不必重復步驟1，如果是內參等表達量高的蛋白，可以重復步驟1三次，以保證徹底去除了抗體。） 3. 每用鑷子取出印跡膜，加入洗滌緩沖液TBST或PBST，在脫色搖床上中速震蕩洗滌3次，每次5分鐘。 4. (可選)通過顯色曝光等方法檢測抗體是否去除，如檢測到信號，需重復步驟1，確保抗體被除盡。 5. 對印跡膜重新進行封閉，進入下一輪Western Blot 實驗。 保存條件 室溫保存，運輸，一年有效 注意事項 1. 建議先檢查表達量低的蛋白，再用NCM Western Blot Stripping Buffer處理印跡膜后，檢測表達量高的蛋白； 2. 本品適用于NC膜和PVDF膜，推薦使用PVDF膜，效果更佳； 3. 為了安全和健康，請穿實驗服，戴手套操作
NCM/新賽美 蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液-200ml
基本售價：199.00元
產品介紹 NCM Western Blot Stripping Buffer（蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液）是新賽美生物生產的用于去除結合在印跡膜（PVDF膜或NC膜）上的一抗和二抗的洗滌液。該產品作用溫和，不含有毒有味的巰基乙醇，在不影響目的蛋白的情況下，可使同一張印跡膜進行多次抗體檢測。省去反復電泳和轉膜等步驟，節省樣品及時間，加快Western Blot檢測實驗。 產品特色 ? 獨有的配方，去除抗體效力強 ? 對蛋白作用溫和，不影響目的蛋白 ? 不含有巰基乙醇，無毒無味，室溫條件下使用保存 ? 適用PVDF膜和NC膜，加速抗體檢測 操作步驟 1. 將曝光結束的蛋白印跡膜充分浸入適當體積的NCM Western BlotStripping Buffer（蛋白印跡膜再生液/抗體剝離液）中，抗體剝離液要充分覆蓋膜的表面，在脫色搖床上，室溫中速震蕩孵育10分鐘，棄去剝離液。 2. （可選）重復步驟1。（對于信號正?；蜉^弱的印跡膜也可以不必重復步驟1，如果是內參等表達量高的蛋白，可以重復步驟1三次，以保證徹底去除了抗體。） 3. 每用鑷子取出印跡膜，加入洗滌緩沖液TBST或PBST，在脫色搖床上中速震蕩洗滌3次，每次5分鐘。 4. (可選)通過顯色曝光等方法檢測抗體是否去除，如檢測到信號，需重復步驟1，確?？贵w被除盡。 5. 對印跡膜重新進行封閉，進入下一輪Western Blot 實驗。 保存條件 室溫保存，運輸，一年有效 注意事項 1. 建議先檢查表達量低的蛋白，再用NCM Western Blot Stripping Buffer處理印跡膜后，檢測表達量高的蛋白； 2. 本品適用于NC膜和PVDF膜，推薦使用PVDF膜，效果更佳； 3. 為了安全和健康，請穿實驗服，戴手套操作
NCM/新賽美 磷酸酶抑制劑混合液
基本售價：249.00元
產品介紹 新賽美生物的磷酸酶抑制劑混合液（ProtLytic Phosphatase Inhibitor Cocktail）是經優化好的多種 磷酸酶抑制劑的混合物組成的，是一種廣譜的抑制劑混合物，在抽提和純化蛋白時能夠 有效防止蛋白被內源性的磷酸酶降解。成分主要含有 sodium fluoride，sodium orthovanadate，Sodium Pyrophosphate，β-glycerophosphate，Imidazole 等多種抑制劑， 主要抑制酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、ATP 酶等，用于蛋白純化，蛋白免疫印跡, 免疫共 沉淀，免疫熒光，免疫組織化學，激酶測定等研究。 操作步驟 將磷酸酶抑制劑混合液，根據實驗體系的需求，按照 1:100 的比率將其加入到樣品 溶液中（如組織抽提物或細胞裂解物）。 保存條件 4 ℃保存，冰袋運輸，至少 1 年有效； 注意事項 1. 磷酸酶抑制劑會損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危 險 2. 不同樣品中含有的磷酸酶量及種類不同，可根據具體實驗調整加入磷酸酶抑制劑混合液 的量，如加入 2 倍，3 倍等量，才能有效抑制內源性磷酸酶的作用 3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴防護手套操作
NCM/新賽美 蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合液
基本售價：399.00元
產品介紹 新賽美生物的蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合液（Protease and PhosphataseInhibitor Cocktail） 是經優化好的多種蛋白酶和磷酸酶抑制劑的混合物組成的，僅用一種溶液即可方便地完 成在抽提和純化蛋白時，能夠有效防止蛋白被內源性的蛋白酶和磷酸酶的降解。成分含 有 Aprotinin，Bestatin，Leupetin，Pepstatin，PMSF，NaF，Sodium Orthovanadate，Sodium Pyrophosphate 等多種蛋白酶和磷酸酶家族的抑制劑，主要抑制氨基肽酶、半胱氨酸和 絲氨酸蛋白酶、絲氨酸/蘇氨酸和酪氨酸蛋白酶和磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶、堿性磷 酸酶、酸性磷酸酶等，用于蛋白純化，蛋白免疫印跡, 免疫共沉淀，免疫熒光，免疫組 織化學，激酶測定等研究。 操作步驟 在室溫下溶解含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合液，混勻之后，根據實驗體系的需求， 按照 1:100 的比率將抑制劑混合液加入到樣品溶液中（如組織抽提物或細胞裂解物）。 保存條件 -20 ℃保存，冰袋運輸，至少 1 年有效； 注意事項 1. 蛋白酶和磷酸酶抑制劑嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收 后有致命危險； 2. 不同樣品中含有的蛋白酶和磷酸酶的量及種類不同，可根據具體實驗調整加入抑制劑混 合液的量，如加入 2 倍，3 倍等量，才能有效抑制內源性蛋白酶和磷酸酶的作用 3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴防護手套操作
NCM/新賽美 RIPA裂解液
基本售價：199.00元
產品介紹 RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液。新賽美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 等。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS 等多種裂解劑和抑制劑，能有效地抑制蛋白 降解。 操作步驟 對于培養細胞樣品： 1. 取適當量的NCM RIPA Buffer 裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 注意：NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制劑，根據需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制劑。 2. a.對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使 裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。 b. 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。 對于組織樣品： 1. 把組織剪切成細小的碎片。 2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃 度為 1mM。 3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加 更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western 和免疫沉淀 等操作。 6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解 充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點 是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。 保存條件 4℃保存，室溫運輸，1 年有效； 注意事項： 1.RIPA 裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因 組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清 用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明 膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如 NFκB、p53 等時，通 常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。 2．為獲得最佳的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復凍融。 3．PMSF 應現用現加,需自備 PMSF。 4．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 5．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦 直接接觸，請立即用流水沖洗，再向醫療保健結構咨詢。
NCM/新賽美 Cell Counting Kit-8-5000T
基本售價：2499.00元
產品介紹 Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是MTT，XTT等的替代方法，一種基于WST-8（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的Formazan。對于同樣的細胞，顏色的深淺(生成的Formazan量)和細胞數目呈線性關系?？捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖和毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。 操作步驟 一. 制作標準曲線（測定細胞具體數量） 1.先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞； 2.按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做4-7個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔； 3.接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加入CCK-8試劑（按每100 μL培養基加10μL CCK-8）培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。（使用此標準曲線的前提條件是試驗條件完全一致） 二. 細胞活性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)，將培養板放在培養箱中預培養一段時間； 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡，它們會影響OD值的讀數)； 3.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時； 4.用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。 三.細胞增殖-毒性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)，將培養板放在培養箱中預培養24小時； 2.向培養板加入不同濃度的待測藥物； 3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間； 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡)； 5.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時； 6.用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。 注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次， 然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 四.活力計算 細胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*（%）=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:實驗孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8 溶液和藥物溶液)； Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液，不含藥物) ； Ab: 空白孔吸光度 (含培養基、CCK-8 溶液，不含細胞、藥物) 。 保存條件 4℃避光保存，有效期12個月；-20℃避光保存，有效期24個月 實驗應用 1. 細胞增殖測定：CCK-8是水溶性的，在培養基中穩定且無毒。 2. 細胞活性分析，包括細胞毒性：代謝活性以及染料的形成與細胞的活性和損傷成比例。 3. 細胞因子分析：測定細胞因子誘導的增殖，必要時，可在試驗結束時回收和擴增細胞 注意事項 1.CCK-8的培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度，根據細胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。 2.使用96孔板進行檢測時，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發問 題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS,水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。 4.加入藥物中如含有金屬，對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%,90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100% 抑制。 5.培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。 6.本產品可以檢測革蘭氏陰性細菌，但不能檢測革蘭氏陽性細菌和酵母細胞。向100μL培養液中加入10μL CCK-8溶液，并培養1-4小時或過夜。 7.CCK-8試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深，OD值不斷增加(注: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的)。 8.要測定細胞的具體數量，建議同時做標準曲線。 9.建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。 10.以下方法可以終止CCK-8反應(96 孔板)：(a).在顯色反應后，將培養板放置4°C冰箱內。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸鈉)溶液。注意：反應停止后，應在24小時內測定。 11. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。 12. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
CM/新賽美 Cell Counting Kit-8-500T
基本售價：299.00元
產品介紹 Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是MTT，XTT等的替代方法，一種基于WST-8（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的Formazan。對于同樣的細胞，顏色的深淺(生成的Formazan量)和細胞數目呈線性關系。可用于藥物篩選、細胞增殖和毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。 操作步驟 一. 制作標準曲線（測定細胞具體數量） 1.先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞； 2.按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做4-7個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔； 3.接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加入CCK-8試劑（按每100 μL培養基加10μL CCK-8）培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量。（使用此標準曲線的前提條件是試驗條件完全一致） 二. 細胞活性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)，將培養板放在培養箱中預培養一段時間； 2.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡，它們會影響OD值的讀數)； 3.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時； 4.用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。 三.細胞增殖-毒性檢測 1.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)，將培養板放在培養箱中預培養24小時； 2.向培養板加入不同濃度的待測藥物； 3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間； 4.向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要產生氣泡)； 5.將培養板置于培養箱內孵育1-4小時； 6.用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。 注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次， 然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 四.活力計算 細胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100% 抑制率*（%）=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100% As:實驗孔吸光度(含細胞、培養基、CCK-8 溶液和藥物溶液)； Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養基、CCK-8 溶液，不含藥物) ； Ab: 空白孔吸光度 (含培養基、CCK-8 溶液，不含細胞、藥物) 。 保存條件 4℃避光保存，有效期12個月；-20℃避光保存，有效期24個月 實驗應用 1. 細胞增殖測定：CCK-8是水溶性的，在培養基中穩定且無毒。 2. 細胞活性分析，包括細胞毒性：代謝活性以及染料的形成與細胞的活性和損傷成比例。 3. 細胞因子分析：測定細胞因子誘導的增殖，必要時，可在試驗結束時回收和擴增細胞 注意事項 1.CCK-8的培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度，根據細胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。 2.使用96孔板進行檢測時，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發問 題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS,水或培養液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。 4.加入藥物中如含有金屬，對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%,90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100% 抑制。 5.培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。 6.本產品可以檢測革蘭氏陰性細菌，但不能檢測革蘭氏陽性細菌和酵母細胞。向100μL培養液中加入10μL CCK-8溶液，并培養1-4小時或過夜。 7.CCK-8試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深，OD值不斷增加(注: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的)。 8.要測定細胞的具體數量，建議同時做標準曲線。 9.建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。 10.以下方法可以終止CCK-8反應(96 孔板)：(a).在顯色反應后，將培養板放置4°C冰箱內。(b).每孔加10μL 0.1M HCl溶液。(c).每孔加10μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸鈉)溶液。注意：反應停止后，應在24小時內測定。 11. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。 12. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
NCM/新賽美 水浴鍋抑菌劑
基本售價：399.00元
產品介紹 WaterBathCleaner（水浴鍋抑菌劑）是一種即用型的，專門用于清除和抑制水浴鍋中細 菌、真菌、支原體等微生物清除的一款產品。本品主要成分是一種陽離子表面活性劑， 系廣譜殺菌劑，能改變細菌胞漿膜通透性，使菌體胞漿物質外滲，阻礙其代謝而起殺滅 作用。能夠有效清除細胞培養的各類細菌、真菌、支原體等微生物，尤其對水中的細菌、 真菌及其芽孢和孢子抑制可長達 7天。 產品特色 ? 安全性：使用濃度下對皮膚和組織無刺激性，無任何不良反應 ? 高效廣譜殺菌劑，對細菌、真菌、支原體等殺力強 ? 對金屬、橡膠制品無腐蝕作用 ? 安全長效，抑制效果長達 7天 操作步驟 1.本品水浴鍋抑菌劑以 1000倍的濃縮液形式提供，初次使用建議先清潔水浴鍋， 2.然后直接按照 1:1000的比例向水浴鍋中加入本品 保存條件 室溫保存運輸，至少 1年有效； 注意事項 1.本品僅供科研使用，勿做其他用途 2.使用本試劑前請仔細閱讀說明書 3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
NCM / 新賽美 快速封閉液
基本售價：249.00元
產品介紹 NcmBlot blocking buffer（快速封閉液）是一種即用型，高效快速應用于 Western Blot 等實驗的封閉液。封閉 時間僅需 10 分鐘，效果優于脫脂奶粉、BSA、酪蛋白等傳統封閉液，獲得更高的信號，更低的背景值，信噪 比高。該試劑不含有哺乳動物來源的蛋白成分，避免與抗體發生交叉反應，適用于磷酸化的抗體，但不可用 于生物素標記的抗體。 產品特色 ? 即用型封閉液，無需配制 ? 封閉時間短，僅需 10 分鐘 ? 背景低，信噪比高，優于常規奶粉等封閉的效果 ? 不含哺乳動物來源的蛋白，適用于磷酸化的抗體 操作步驟 1. 完成轉膜后，將膜移入到平皿或者其他適合的容器中（可以不洗滌膜）。 2. 根據膜的大小，加入適量體積的 NcmBlot Blocking Buffer 封閉液，需完全浸沒覆蓋膜，對于 7.5x 8cm 的膜推薦使用量 5-10ml。 3. 置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育 10 分鐘。 4. 取出封閉完成的膜，用洗滌液沖洗蛋白膜 2-3 次，即可用于一抗孵育等后續 western blot 實驗。 保存條件 4℃保存，冰袋運輸，至少 1 年有效； 注意事項 1. 通常用于 PVDF 膜或 NC 膜的封閉時間為 10 分鐘。對于背景低的抗體，可以縮短到 5 分鐘，而對于一些背景 非常高的抗體，可以嘗試將封閉時間延長為 30-60 分鐘。 2. 沒有任何一種封閉液是適用于所有實驗體系的，因此對于一些特殊的實驗或抗體，可能需要具體情況考慮使 用其它更合適的封閉液，比如奶粉、BSA 等封閉試劑。 3. 信號弱或者無信號：有可能是上樣量不足；轉膜效率低；抗體效價低，特異性差等原因造成，需要根據實驗 情況進行調整 4. 背景高：有可能是抗體使用量過多；蛋白膜洗滌時間不足；抗體和封閉液發生交叉反應；試劑或儀器設備被 污染等原因造成，需要根據實驗具體情況進行調整。 5. 本產品僅限于科研使用，實驗時請穿實驗服并戴一次性手套操作。
NCM/新賽美 超敏ECL化學發光試劑盒
基本售價：459.00元
產品介紹 NcmECL Ultra是新賽美生物科技有限公司研發的超敏ECL（Enhanced Chemiluminescent） 化學發光試劑，用于檢測 HRP（辣根過氧化物酶）標記的目的條帶，檢測靈敏度最高可達飛 克（fg）級。NcmECL Ultra 優化了底物的成分，應用了新型的 Enhancer 和氧化劑，發光強度 更高，穩定性更好，不含有毒試劑，安全性更高。 產品特色 ? 高靈敏度：最高可達飛克級別，10-15 g ? 安全性高：試劑不含對人體健康有毒的化學物質 ? 信號持續時間長：發光時間長達 30 分鐘以上 ? 穩定性高：室溫運輸穩定性好 ? 經濟節約：較同類進口試劑花費更少，所需抗體少，抗體稀釋度高 操作步驟 1. 準備工作稀釋液，將 NcmECL Ultra Luminol/Enhancer Reagent (A) 和 NcmECL Ultra Stabilized Peroxide Reagent (B) 按體積比例 1:1 混合 注：為了獲得最佳效果，使用前準備稀釋液并立即使用。吸取 NcmECL Ultra 不同 組份時要換移液管，以免污染試劑。 2. 從 TBST 或 PBST 緩沖液的托盤中取出膜，小心移去膜上的多余緩沖液，但不要讓膜干燥。 3. 將膜上有蛋白的一面朝上平整地鋪在一張紙板上，加上配好的工作稀釋液。用量以覆 蓋膜為基準，1ml 工作液可以覆蓋大約 10cm2的膜。 4. 將膜與工作稀釋液孵育 1-5min，以確保整個表面覆蓋。 5. 通過放射自顯影膠片或成像設備獲取信號。對于一個未知的信號，可調節不同曝光的 時間來獲得最佳結果。 保存條件 室溫運輸，請于 4℃保存，有效期為 2 年。
NCM/新賽美 超敏ECL化學發光試劑盒
基本售價：1600.00元
產品介紹 NcmECL Ultra是新賽美生物科技有限公司研發的超敏ECL（Enhanced Chemiluminescent） 化學發光試劑，用于檢測 HRP（辣根過氧化物酶）標記的目的條帶，檢測靈敏度最高可達飛 克（fg）級。NcmECL Ultra 優化了底物的成分，應用了新型的 Enhancer 和氧化劑，發光強度 更高，穩定性更好，不含有毒試劑，安全性更高。 產品特色 ? 高靈敏度：最高可達飛克級別，10-15 g ? 安全性高：試劑不含對人體健康有毒的化學物質 ? 信號持續時間長：發光時間長達 30 分鐘以上 ? 穩定性高：室溫運輸穩定性好 ? 經濟節約：較同類進口試劑花費更少，所需抗體少，抗體稀釋度高 操作步驟 1. 準備工作稀釋液，將 NcmECL Ultra Luminol/Enhancer Reagent (A) 和 NcmECL Ultra Stabilized Peroxide Reagent (B) 按體積比例 1:1 混合 注：為了獲得最佳效果，使用前準備稀釋液并立即使用。吸取 NcmECL Ultra 不同 組份時要換移液管，以免污染試劑。 2. 從 TBST 或 PBST 緩沖液的托盤中取出膜，小心移去膜上的多余緩沖液，但不要讓膜干燥。 3. 將膜上有蛋白的一面朝上平整地鋪在一張紙板上，加上配好的工作稀釋液。用量以覆 蓋膜為基準，1ml 工作液可以覆蓋大約 10cm2的膜。 4. 將膜與工作稀釋液孵育 1-5min，以確保整個表面覆蓋。 5. 通過放射自顯影膠片或成像設備獲取信號。對于一個未知的信號，可調節不同曝光的 時間來獲得最佳結果。 保存條件 室溫運輸，請于 4℃保存，有效期為 2 年。
NCM/新賽美 無血清細胞凍存液
基本售價：399.00元
產品介紹 CELLSAVINGTM是一種無血清細胞凍存液，通用于各種動物細胞株（腫瘤細胞和常規細胞）， 凍存細胞可在-80℃長期保存（>5 年）。CELLSAVINGTM配方成分明確，不含動物來源性蛋白， 不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。該凍存液含 DMSO、 葡萄糖等各種細胞營養成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達 細胞。 產品特色 ? 即用型細胞凍存液 ? 直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5 年），不需要程序性降溫 ? 高安全性，病毒、病菌和支原體等污染可能性低 ? 細胞存活率和活力高，批次性差異小 操作步驟 細胞凍存步驟 1. 常規方法收集對數期的貼壁細胞或懸浮細胞于試管中。 2. 根據培養細胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細胞數。 3. 將所需數目的細胞懸浮液置于離心管中，1000rmp，5 分鐘離心收集培養細胞沉淀，徹底 棄去離心管中的上清液。 4. 加入適量的 CELLSAVINGTM 細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度約為 5×105-1×107 /ml。輕 柔地混勻細胞，制成細胞混合液。 5. 將離心管中的細胞混合液分裝于已標記的凍存管中，建議每管 1ml 或 1.5ml。 6. 直接將分裝好的細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。 7. 如果想液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時間，方可移至液氮罐中保存。 凍存細胞復蘇步驟 1. 從冰箱中取出凍存的細胞，立即放入 37℃水浴槽中快速解凍。 2. . 待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入 1ml 細胞培養基于冷凍管中與細胞混合， 將其中的混合液移至含有約 5ml 該細胞培養基的離心管中，1000rmp，5 分鐘離心收集凍 存細胞沉淀，移去上清液（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）。 3. 加入適量的新鮮細胞培養基，使用移液管緩緩加入到細胞沉淀，輕柔地混勻，將細胞混 合液移至事先準備好的培養容器中。 4. 鏡檢細胞后，可根據各自研究的需要和方法經行細胞常規培養。 保存條件 常溫運輸，4℃保存，長期不用，-20℃保存，有效期 36 個月 質量保障 CELLSAVINGTM細胞凍存液經過嚴格的內毒素、滲透壓、病原體和 pH 檢驗，確保產品 不含病菌、病毒以及支原體等。用于常規的細胞凍存，-80℃可長期保存（>5 年），細胞 存活率在 90-98%。 注意事項 1.CELLSAVING TM 在凍存細胞分裝后，應減少在外存放時間，盡快移入到-80 ℃超低溫 冰箱。 2.對于干細胞（ES 細胞）等凍存時，我們建議用戶在使用前，事先對所凍存的胞進行 至少為期 1 周的該產品試驗性細胞冷凍保存培養，確認性能后再進行正式凍存。 3. CELLSAVINGTM含有 10%DMSO，部分對 DMSO 敏感的細胞，建議對其進行至少 1 周 的本產品試驗性的細胞凍存培養，確認性能后再正式凍存。 免責聲明: 本公司將不為任何不正常使用此產品時所發生的意外負責
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