RIPA Lysis Buffer normal

【保存條件】 

-20℃保存，有效期 1 年，頻繁使用可放置 4℃保存。 

【概述】 

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得 到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 和 ELISA 等。 

RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多種，根據(jù)其 裂解液的強(qiáng)度大致可以分為高強(qiáng)度、中強(qiáng)度、低強(qiáng)度三類。請(qǐng)根據(jù)不同需求選擇不同強(qiáng)度 RIPA 裂解液。 

【使用建議】 

如發(fā)現(xiàn) RIPA 有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。根據(jù)使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。混勻備用（PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。 

1. 樣品前處理： 

a) 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每 孔細(xì)胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分 接觸。 

b) 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有 明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。 

c) 對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250μl 裂解液的 比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白 樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 

2. 后處理：將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃 度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 

【注意事項(xiàng)】 

1. 為了您的安全與健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

2. 本產(chǎn)品長(zhǎng)時(shí)間低溫存放可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解后即可正常使用。 

3. 為保證最佳的使用效果，請(qǐng)盡量避免過多的反復(fù)凍融，可分裝后使用。 

4. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。 

5. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物 為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下， 可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可 以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些 常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到 這些轉(zhuǎn)錄因子。 

6. 該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途