2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液（DTT）使用說明書

【包裝規(guī)格】

【保存條件】

建議分裝凍存，避免反復凍融，-20℃，有效期1年

【概述】

2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質(zhì)在樣品制備步驟中免受熱降解，并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質(zhì)對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感，優(yōu)化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質(zhì)降解。SDS可與蛋白質(zhì)結合使蛋白質(zhì)-SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋，消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)結構，消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關。

溴酚藍作為指示劑，用于追蹤電泳進度。

【使用建議】

1. 室溫解凍2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液。

2. 請按每10μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。

3. 混勻后，100℃水浴加熱5-10分鐘，使蛋白變性。

4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm離心2-5分鐘，取上清直接上樣電泳即可。

【注意事項】

1.     DTT對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2.     為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3.     蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑，PH值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態(tài)下，溶液可能會呈現(xiàn)深棕色，不影響產(chǎn)品使用。

4.     聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右， 膠濃度為12%時，約在20kd左右，膠濃度為15%時，大概在10kd。請根據(jù)自己目標條帶來判斷結果電泳時間。