ChIP-Seq Nuclear Lysis buffer

【保存條件】 

-20 ℃保存，有效期 12 個月 

【概述】 

本品適用于小片段（5-500bp）單鏈 DNA 的雜交反應，獲得更優質的雜交雙鏈 DNA 片段，如 shRNA、gRNA 載體等構建。 

【操作方法】 

1. 收獲細胞核后，將細胞核重懸于 3-5 倍體積的冰冷的 ChIP-Seq 核裂解緩沖液中（5 倍體積取決于細胞核 提取過程中細胞裂解液用量，如細胞裂解液用量為 100μl 則加入 500μl ChIP-Seq 核裂解液） 

2. 將試管在冰上孵育 20 分鐘。 

3．從每個樣品中取 5 μL 等分試樣，并用 15 μL TE 稀釋以用于分析凝膠確認。（注：將剩余保存在冰上或 凍-20 ℃，直到需要為止。該樣品用于確認染色質在分離前是完整的。） 

4. 將試管放入設定為 2°C 的超聲浴中, 調節水位，使管子剛好接觸杯墊的表面。。 如用 Misonix 431A 對每個試管進行 300 μl 的超聲處理非常穩定，因此我們建議將較大的樣品分成多個試管進行超聲處理。將至少兩個和多達 8 個試 管放入超聲儀的試管支架中。 

5. 用 10 秒的脈沖和 10 秒的靜止時間以 20 的振幅對樣品進行超聲處理，總超聲時間為 30 分鐘。 

6. 從超聲儀中取出樣品，并保存在冰上。 

7. 取 5 μl 樣品，并用 15 μl TE 稀釋以用于分析凝膠。 

8. 在 37°C 下，用 10 μg RNase A 樣品 15 分鐘。 

9. 在 65°C 下用 20 μg 蛋白酶 K 樣品 30 分鐘。 

10. 在 95°C 下反向交聯 5 分鐘，使樣品緩慢冷卻至室溫。 需要執行這些步驟以確保 DNA 在瓊脂糖凝膠上的正確遷移。否則，將發生比預期高得多的分子量的涂污或遷移。 

11. 將加樣染料添加到每個樣品中，并在 TAE 運行緩沖液中的 1％瓊脂糖凝膠上分離樣品。 

12. 凝膠成像儀下觀察瓊脂糖凝膠上的 DNA 樣品。 剪切染色質的大小應在 200 至 500 bp 之間。 

13. 若步驟 12 完成后鑒定可行，將步驟 6 中其余樣品在 4°C 下以 16,000 g 的速度離心 10 分鐘，以去除不 溶物。 

14. 將可溶的剪切染色質轉移到新鮮的 1.5ml 離心管中。 染色質可以在液氮中冷凍，并在-80°C 下保存直至需要。 

15．按上述方法用 RNase A，蛋白酶 K 和交聯逆轉處理等分試樣（步驟 8-10）。 

16．使用 QIAquick PCR 純化試劑盒純化染色質，并使用 NanoDrop 等測量 DNA 濃度。 

【注意事項】 

1. 如果每次的使用量很小，可以適當分裝后再使用，以免污染。 

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。