4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書
【包裝規格】
產品編號 |
產品名稱 |
包裝 |
ES-8153 |
SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT) |
1ml/10ml/100ml |
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使用說明書 |
1份 |
【保存條件】
建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年
【概述】
4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。
上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。
【使用建議】
1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。
2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。
3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。
4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。
【注意事項】
1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。
4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。
5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。
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