SDS-PAGE Loading buffer,4×(with β-Mercaptoethanol)

【保存條件】 

建議分裝凍存，避免反復凍融，-20℃，有效期 1 年 

【概述】 

4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解，并在 SDS-PAGE 運行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動引起 的 pH 變化敏感，優化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中 以及電泳過程中蛋白質降解。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷，這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋，消除了各種蛋白質本身電荷的差異；SDS 還 可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構。β-巰基乙醇可以斷開 半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質結構，消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關。 

溴酚藍作為指示劑，用于追蹤電泳進度。 

【使用建議】 

1. 室溫解凍 4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液。 

2. 請按每 30μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(4 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高，可用雙蒸水稀釋。 

3. 混勻后，100℃水浴加熱 5-10 分鐘，使蛋白變性。 

4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘，取上清直接上樣電泳即可。

【注意事項】 

1. β-巰基乙醇對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護。 

2. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在 30kd 左右， 膠濃度為 12時，約在 20kd 左右，膠濃度為 15%時，大概在 10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 

4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑，PH 值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態下，溶液 可能會呈現深棕色，不影響產品使用。