SDS lysis buffer

【保存條件】 

4℃保存，有效期 1 年。 

【概述】 

SDS 裂解液是一種較為強烈的細胞組織裂解液，可用于動物、植物的細胞或組織樣品， 也可以用于真菌或細菌樣品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 PAGE、 Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 

【使用建議】 

1.對于培養細胞樣品： 

a.取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM，或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 

b.對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋 白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞 1-2 秒后，細胞就會被裂解。 植物細胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 

對于懸浮細胞：

離心收集細胞，輕輕渦旋或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照 6 孔板每 孔細胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 

對于細菌或酵母：

對于 1ml 菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗滌一 次，充分去除液體后，輕輕渦旋或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入 100-200μl 裂 解液，輕輕渦旋或者彈擊管底以混勻，冰上裂解 2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果， 細菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液進行裂解。 

裂解液用量說明：

通常6孔板每孔細胞或者1ml的菌液或酵母液中的細菌和酵母量加入150μl 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每 100 萬動物細胞用 100μl 本產品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 2-4mg/ml，不同細胞所不同。 c.充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。

2.對于組織樣品： 

a.把組織剪切成細小的碎片。 

b.融解 SDS 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入 PMSF，使 PMSF 的 最終濃度為 1mM，或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 

c.按照每 20mg 組織加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添 加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。) 

d.用玻璃勻漿器勻漿，或使用組織研磨儀研磨，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液 氮研磨，研磨充分后加入裂解液進行裂解。如果用于 ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂 解 10 分鐘。 

e.充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。每 20mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200μl 本裂解液裂解后獲得的上清，其蛋白濃 度約為 15-25mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同。 

f.如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品 裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻 漿器或研磨設備，缺點是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。

【注意事項】 

1. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

2. 本產品長時間低溫存放可能會出現沉淀，可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解混勻后即可正常使用。 

3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 

4. 該試劑僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。