廣州億濤生物科技公司(ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY),由中山大學生命科學領域專業人士和業內專業營銷人才共同組建成立。“持續改善動物及人類健康”是公司的愿景,自成立以來一直潛心研究、注重細節,專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前,ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域,涉及NGS伴隨診斷行業、畜牧行業、水產養殖業、高校科研等行業。
操作步驟:1. 取200μl細菌菌液(最多不超過1×109cells)于無酶1.5ml離心管中。2. 10000×g離心1min或3000×g離心5min收集細菌沉淀。3. 加入200μl無菌PBS將細菌重懸。注意:為盡可能減少LB等細菌培養基對提取過程中的影響,可重復步驟2-3一次。4. 加入30μlLysozyme Solution至溶液中,充分渦旋混勻15-20s后37℃孵育15-30min。5. (可選)加入5μl RNaseASolution(20mg/ml,自備)至消化液中,顛倒混勻,室溫或37℃放置5-10min。6. 將所得溶液加入200μl Buffer BB并充分混勻,加入20μl ProteinaseK Solution后立即混勻,徹底混勻后置于70℃水浴中孵育10min。7. 將溶液從水浴中取出,并加入100μl異丙醇充分混勻。8. 于13000×g離心5min,離心結束后取上清溶液加入核酸吸附柱(提前套在2ml收集管中)。9. 以8000×g離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。10. 向吸附柱中加入500μl Buffer IRB,8000×g離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。11. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB(已加入無水乙醇),8000×g離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。12. 重復操作步驟11一次。13. 倒掉收集管中的廢液后將吸附柱再次套入收集管中,最大轉速 (~13,400×g)離心2min以除盡Buffer WB。將吸附柱套入新的1.5ml無酶離心管中并置于室溫放置5-10min徹底晾干乙醇。注意:Buffer WB中的乙醇殘留會影響后續的酶反應實驗。14. 向吸附柱膜中間位置懸空滴加50-100μl BufferEB,室溫靜置2min后,最大轉速(~13,400×g)離心2min收集核酸溶液。丟棄柱子,蓋上EP管蓋子置于-20℃保存。注意:洗脫體積不應小于30μl,體積過少會影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。為了提高DNA的回收量,可將BufferEB加熱(約60℃)并洗脫兩次,可增加約15-20%得率。
從10-250ul血液及相關體液等樣品中直接提取總DNA產品介紹 本試劑盒適用于哺乳動物血液核酸提取,不含苯酚等有毒化學試劑組分,采用獨特的緩沖液配方 Buffer IRB 最大限度去除血液抑制劑的影響,同時應用先進的硅膠膜吸附技術,操作簡單、快速。得到的 DNA 比傳統試劑盒純度更高,可直接用于酶切、轉化、測序及 PCR 等分子生物學實驗。 存儲條件 本產品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外,可在室溫(15~25℃)保存 12 個月。低溫下 Buffer BL 或 Buffer IRB 可能會有沉淀形成,使用時需 55℃水浴讓沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋運輸,收到產品后請分裝保存于-20℃。 需要額外準備的材料 □ 無水乙醇(96%-100%) □ 無菌 1.5/2ml 離心管 開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。 ● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混濁現象,可在 55℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。 ● 基因組提取所有步驟都在室溫(15-25°C)下進行。 開始前試劑準備 □ 按瓶子標簽所示,Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入適量的無水乙醇稀釋,于室溫密封保存。 DNA 濃度及純度檢測 ? 回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測純度與濃度。 ? DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。 ? OD260/OD280 比值應為 1.7-2.0,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用 ddH2O,比值會略低,因 為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。 應用領域 該方案適合于從約 10μl-1ml 人類的抗凝血液、血清、血漿、尿液、或其它體液樣品中直接提取總 DNA。 該方案直接對樣品進行裂解消化,獲得的 DNA 包括了基因組 DNA(如淋巴細胞、線粒體 DNA、游離的 DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等;
從10-250ul血液及相關體液等樣品中直接提取總DNA產品介紹 本試劑盒適用于哺乳動物血液核酸提取,不含苯酚等有毒化學試劑組分,采用獨特的緩沖液配方 Buffer IRB 最大限度去除血液抑制劑的影響,同時應用先進的硅膠膜吸附技術,操作簡單、快速。得到的 DNA 比傳統試劑盒純度更高,可直接用于酶切、轉化、測序及 PCR 等分子生物學實驗。 存儲條件 本產品除 Proteinase K 溶液和 RNase 溶液外,可在室溫(15~25℃)保存 12 個月。低溫下 Buffer BL 或 Buffer IRB 可能會有沉淀形成,使用時需 55℃水浴讓沉淀完全溶解。Proteinase K 溶液和 RNase A 溶液冰袋運輸,收到產品后請分裝保存于-20℃。 需要額外準備的材料 □ 無水乙醇(96%-100%) □ 無菌 1.5/2ml 離心管 開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。 ● Buffer BL 和 Buffer IRB 是如有混濁現象,可在 55℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。 ● 基因組提取所有步驟都在室溫(15-25°C)下進行。 開始前試劑準備 □ 按瓶子標簽所示,Buffer BL 及 Buffer IRB 中加入適量的無水乙醇稀釋,于室溫密封保存。 DNA 濃度及純度檢測 ? 回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測純度與濃度。 ? DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。 ? OD260/OD280 比值應為 1.7-2.0,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用 ddH2O,比值會略低,因 為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。 應用領域 該方案適合于從約 10μl-1ml 人類的抗凝血液、血清、血漿、尿液、或其它體液樣品中直接提取總 DNA。 該方案直接對樣品進行裂解消化,獲得的 DNA 包括了基因組 DNA(如淋巴細胞、線粒體 DNA、游離的 DNA(>100bp)、以及病毒 DNA(如乙肝)等;