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ECOTOP
廣州億濤生物科技公司（ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY），由中山大學(xué)生命科學(xué)領(lǐng)域?qū)I(yè)人士和業(yè)內(nèi)專業(yè)營銷人才共同組建成立。“持續(xù)改善動物及人類健康”是公司的愿景，自成立以來一直潛心研究、注重細(xì)節(jié)，專注于打造高品質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)化的生物相關(guān)產(chǎn)品。目前，ECOTOP SCIENTIFIC產(chǎn)品線涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域，涉及NGS伴隨診斷行業(yè)、畜牧行業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)、高校科研等行業(yè)。
高效病毒裂解保護(hù)液0.8ml
基本售價：2.00元
Efficiency Virus Lysis& Storage Solution 【保存條件】室溫儲藏穩(wěn)定一年。【概述】 本產(chǎn)品提供了一種簡單、安全、有效的保存咽拭子、鼻拭子、唾液等樣本的方法，可在常溫下保持樣本中的核酸在一定時間內(nèi)完整、不降解，為獲得下游實驗所需要的高質(zhì)量核酸提供了可靠保障。產(chǎn)品使用后，可在常溫下保存樣本 1-2 周，如需更長時間保存，請置于-80℃。【使用說明】 例：口腔拭子1．取樣前將溶液分裝到采集管中，0.5-0.8ml 為佳。2．按照不同的采樣要求，用拭子在相應(yīng)部位采樣（見下）。3．采樣后迅速將拭子放入裝有保存液的采樣管中，避免接觸其他部位。4．折斷拭桿，棄去尾部，隨即旋緊管蓋，完成取樣。5．具體采樣方法有以下幾種：咽拭子：將拭子越過舌根，擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁。鼻拭子：將拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。眼分泌物：在眼瞼下充分分擦拭后置于含保護(hù)液采集管中唾液：用拭子沾滿唾液后放入含保護(hù)液的采集管中（或每 0.2ml 唾液加入含 1ml 保護(hù)液采集管中）。其它固體樣本：加入約 3 倍體積的保護(hù)液【注意事項】 1. 本品可在常溫下保存樣本長達(dá) 1 周，鑒于樣本存在的個體差異，不同樣本的具體保存期限有所波動。2. 采樣后可使用商業(yè)化的試劑盒進(jìn)行核酸提取，兼容常規(guī)磁珠法和柱法提取。3. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
高效病毒裂解保護(hù)液500ml
基本售價：299.00元
Efficiency Virus Lysis& Storage Solution 【保存條件】 室溫儲藏穩(wěn)定一年。【概述】 本產(chǎn)品提供了一種簡單、安全、有效的保存咽拭子、鼻拭子、唾液等樣本的方法，可在常溫下保持樣本中的核酸在一定時間內(nèi)完整、不降解，為獲得下游實驗所需要的高質(zhì)量核酸提供了可靠保障。產(chǎn)品使用后，可在常溫下保存樣本 1-2 周，如需更長時間保存，請置于-80℃。【使用說明】 例：口腔拭子1．取樣前將溶液分裝到采集管中，0.5-0.8ml 為佳。2．按照不同的采樣要求，用拭子在相應(yīng)部位采樣（見下）。3．采樣后迅速將拭子放入裝有保存液的采樣管中，避免接觸其他部位。4．折斷拭桿，棄去尾部，隨即旋緊管蓋，完成取樣。5．具體采樣方法有以下幾種：咽拭子：將拭子越過舌根，擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁。鼻拭子：將拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。眼分泌物：在眼瞼下充分分擦拭后置于含保護(hù)液采集管中唾液：用拭子沾滿唾液后放入含保護(hù)液的采集管中（或每 0.2ml 唾液加入含 1ml 保護(hù)液采集管中）。其它固體樣本：加入約 3 倍體積的保護(hù)液【注意事項】 1. 本品可在常溫下保存樣本長達(dá) 1 周，鑒于樣本存在的個體差異，不同樣本的具體保存期限有所波動。2. 采樣后可使用商業(yè)化的試劑盒進(jìn)行核酸提取，兼容常規(guī)磁珠法和柱法提取。3. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
高效病毒裂解保護(hù)液
基本售價：120.00元
Efficiency Virus Lysis& Storage Solution 【保存條件】 室溫儲藏穩(wěn)定一年。【概述】 本產(chǎn)品提供了一種簡單、安全、有效的保存咽拭子、鼻拭子、唾液等樣本的方法，可在常溫下保持樣本中的核酸在一定時間內(nèi)完整、不降解，為獲得下游實驗所需要的高質(zhì)量核酸提供了可靠保障。產(chǎn)品使用后，可在常溫下保存樣本 1-2 周，如需更長時間保存，請置于-80℃。【使用說明】 例：口腔拭子1．取樣前將溶液分裝到采集管中，0.5-0.8ml 為佳。2．按照不同的采樣要求，用拭子在相應(yīng)部位采樣（見下）。3．采樣后迅速將拭子放入裝有保存液的采樣管中，避免接觸其他部位。4．折斷拭桿，棄去尾部，隨即旋緊管蓋，完成取樣。5．具體采樣方法有以下幾種：咽拭子：將拭子越過舌根，擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁。鼻拭子：將拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。眼分泌物：在眼瞼下充分分擦拭后置于含保護(hù)液采集管中唾液：用拭子沾滿唾液后放入含保護(hù)液的采集管中（或每 0.2ml 唾液加入含 1ml 保護(hù)液采集管中）。其它固體樣本：加入約 3 倍體積的保護(hù)液【注意事項】 1. 本品可在常溫下保存樣本長達(dá) 1 周，鑒于樣本存在的個體差異，不同樣本的具體保存期限有所波動。2. 采樣后可使用商業(yè)化的試劑盒進(jìn)行核酸提取，兼容常規(guī)磁珠法和柱法提取。3. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核RNA小量提取試劑盒250T
基本售價：4800.00元
FastPure Cytoplasmic & Nuclear RNA purification Kit HandBookFastPure 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 RNA 小量提取試劑盒說明書產(chǎn)品組成產(chǎn)品介紹本試劑盒可以快速地從哺乳動物細(xì)胞或組織中提取細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核 RNA，不含酚氯仿等有毒試劑。其提取的總 RNA 純度高，無蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)污染，可用于 RT-PCR、Real Time RT-PCR、mRNA 差異顯示、分子克隆等多種下游實驗。本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RN 置于 2-8℃保存；Buffer RT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇（或DTT）的 Buffer RT 可室溫放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩(wěn)定 12 個月。需要額外準(zhǔn)備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規(guī)購買商業(yè)化商品即為 14.3 M)或 2M DTT? 70%乙醇：RNase-Free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無酶 1.5ml 離心管? 無酶吸頭? 干凈的手套? 高速離心機(jī)? 物理研磨設(shè)備開始前注意事項 請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現(xiàn)配現(xiàn)用），如 1 ml Buffer RT中加入 10μl β-巰基乙醇(或加入 20 μl 的 2 M DTT)。配好的 Buffer RT 可在 4℃維持穩(wěn)定一個月。? Buffer RT 在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? 如果執(zhí)行可選的柱上 DNA 酶消化步驟，請制備 DNase I 儲備液：將 DNase I 干粉（1500 U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O 中，輕柔混勻（禁止渦旋），分裝后-20℃貯存（可保存 9 個月）。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細(xì)菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風(fēng)險保證實驗穩(wěn)定性。? RNA 在 Buffer RT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的離心管或玻璃器皿。? RNA 提取操作及離心過程常溫進(jìn)行即可。操作步驟：1.請根據(jù)樣品種類進(jìn)行以下步驟（1a 為動物細(xì)胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細(xì)胞： 懸浮細(xì)胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細(xì)吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細(xì)胞可通過直接裂解法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，待步驟 2 用 Buffer RT裂解）或胰酶處理法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，用 PBS 清洗細(xì)胞，吸除 PBS 后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細(xì)胞脫落，加入含有血清的培養(yǎng)基使胰酶失活后轉(zhuǎn)入無酶 1.5ml 離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細(xì)胞數(shù)量不要超過 1×107，收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)基去除干凈，否則會導(dǎo)致步驟 2 時細(xì)胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結(jié)合，RNA 的產(chǎn)量降低。1b. 動物組織勻漿處理： 將 10mg-30mg 動物組織轉(zhuǎn)移入無酶 1.5ml 離心管中并加入600μl Buffer RT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機(jī)將動物組織徹底研磨勻漿。直接進(jìn)行步驟 3.2.加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞沉淀中，并于冰上孵育 5min。對于未消化收集的培養(yǎng)在 3.5cm 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，可吸凈培養(yǎng)基用 PBS 清洗一次后，直接加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞培養(yǎng)皿中，然后用細(xì)胞刮刀輕輕刮動并轉(zhuǎn)移至無酶 1.5ml 離心管中，并于冰上孵育 5min。對于提前離心沉淀在離心管中的細(xì)胞，通過輕彈離心管以使細(xì)胞沉淀徹底分散開。懸浮液應(yīng)迅速澄清，表明質(zhì)膜立即溶解。注意：細(xì)胞沉淀的不完全分散可能導(dǎo)致裂解效率低下和 RNA 產(chǎn)量降低。3.將上述裂解物在 4oC 下以 300×g 離心 2min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的無酶 1.5ml 離心管中用于細(xì)胞質(zhì) RNA 提取，沉淀用于細(xì)胞核 RNA 提取。如果在此過程的后續(xù)步驟中使用相同的離心機(jī)，則保持離心室溫狀態(tài)。上清液含有細(xì)胞質(zhì)提取物。根據(jù)細(xì)胞類型的不同，它通常略帶混濁和黃白色。沉淀含有細(xì)胞核，上清中為細(xì)胞質(zhì)裂解物。4.于步驟 3 種所得細(xì)胞質(zhì)裂解物及細(xì)胞沉淀管中分別加入 600 μl Buffer RT（使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇或 DTT），充分渦旋混勻。若沉淀物較多，可室溫裂解 3-5min，期間搖勻 2-3 次5.將 430μl 無水乙醇（96–100％）分別加入兩管裂解物中，并用移液器將其充分混合。 不要離心。注意：從某些細(xì)胞系純化 RNA 時，加入乙醇后可能會出現(xiàn)沉淀。 這不會影響后續(xù)提取過程。6.將步驟 5 混勻后的兩管溶液轉(zhuǎn)移入無酶吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g（≥10,000rpm）離心 1min，棄廢液，直至將溶液全部轉(zhuǎn)移完成吸附。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續(xù)操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。7.（可選步驟） 向吸附柱中央加入 80μl DNase Ⅰ 工作液，室溫（15℃-25℃）靜置15min。配制 DNase Ⅰ 工作液： 取 10μl DNase Ⅰ儲備液入新的 RNase-Free 離心管中，并加入 70μl Buffer RDD，輕柔混勻。注意：DNase Ⅰ 對物理變性特別敏感，所以混勻時請上下倒置輕柔混勻，切勿渦旋。請確認(rèn) DNase Ⅰ 工作液加入到正中央的柱膜上，否則 DNase 消化效果會不理想。8.向兩個吸附柱中分別加入 700μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心 30s，棄廢液。9.將兩個吸附柱重收套回收集管中，向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認(rèn) Buffer RPE 按要求加入 4 倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心30s，棄廢液。注意區(qū)分細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核 RNA 的吸附柱10. 重復(fù)步驟 9 一次。11. 倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉(zhuǎn)速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱子。12. 將兩個吸附柱分別套入新的 RNase-Free 的 1.5ml 離心管中，并置于無 RNA 酶的環(huán)境中開蓋靜置 5-10min 至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。13. 向兩個吸附柱膜正中央分別加入 30-50μl RNase-Free Water，蓋上蓋子室溫靜置3-5 min。后置于離心機(jī)中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應(yīng)少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應(yīng)置于-80℃儲存。
細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核RNA小量提取試劑盒100T
基本售價：2400.00元
FastPure Cytoplasmic & Nuclear RNA purification Kit HandBookFastPure 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 RNA 小量提取試劑盒說明書產(chǎn)品組成產(chǎn)品介紹本試劑盒可以快速地從哺乳動物細(xì)胞或組織中提取細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核 RNA，不含酚氯仿等有毒試劑。其提取的總 RNA 純度高，無蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)污染，可用于 RT-PCR、Real Time RT-PCR、mRNA 差異顯示、分子克隆等多種下游實驗。本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RN 置于 2-8℃保存；Buffer RT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇（或DTT）的 Buffer RT 可室溫放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩(wěn)定 12 個月。需要額外準(zhǔn)備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規(guī)購買商業(yè)化商品即為 14.3 M)或 2M DTT? 70%乙醇：RNase-Free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無酶 1.5ml 離心管? 無酶吸頭? 干凈的手套? 高速離心機(jī)? 物理研磨設(shè)備開始前注意事項 請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現(xiàn)配現(xiàn)用），如 1 ml Buffer RT中加入 10μl β-巰基乙醇(或加入 20 μl 的 2 M DTT)。配好的 Buffer RT 可在 4℃維持穩(wěn)定一個月。? Buffer RT 在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? 如果執(zhí)行可選的柱上 DNA 酶消化步驟，請制備 DNase I 儲備液：將 DNase I 干粉（1500 U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O 中，輕柔混勻（禁止渦旋），分裝后-20℃貯存（可保存 9 個月）。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細(xì)菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風(fēng)險保證實驗穩(wěn)定性。? RNA 在 Buffer RT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的離心管或玻璃器皿。? RNA 提取操作及離心過程常溫進(jìn)行即可。操作步驟：1.請根據(jù)樣品種類進(jìn)行以下步驟（1a 為動物細(xì)胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細(xì)胞： 懸浮細(xì)胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細(xì)吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細(xì)胞可通過直接裂解法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，待步驟 2 用 Buffer RT裂解）或胰酶處理法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，用 PBS 清洗細(xì)胞，吸除 PBS 后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細(xì)胞脫落，加入含有血清的培養(yǎng)基使胰酶失活后轉(zhuǎn)入無酶 1.5ml 離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細(xì)胞數(shù)量不要超過 1×107，收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)基去除干凈，否則會導(dǎo)致步驟 2 時細(xì)胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結(jié)合，RNA 的產(chǎn)量降低。1b. 動物組織勻漿處理： 將 10mg-30mg 動物組織轉(zhuǎn)移入無酶 1.5ml 離心管中并加入600μl Buffer RT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機(jī)將動物組織徹底研磨勻漿。直接進(jìn)行步驟 3.2.加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞沉淀中，并于冰上孵育 5min。對于未消化收集的培養(yǎng)在 3.5cm 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，可吸凈培養(yǎng)基用 PBS 清洗一次后，直接加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞培養(yǎng)皿中，然后用細(xì)胞刮刀輕輕刮動并轉(zhuǎn)移至無酶 1.5ml 離心管中，并于冰上孵育 5min。對于提前離心沉淀在離心管中的細(xì)胞，通過輕彈離心管以使細(xì)胞沉淀徹底分散開。懸浮液應(yīng)迅速澄清，表明質(zhì)膜立即溶解。注意：細(xì)胞沉淀的不完全分散可能導(dǎo)致裂解效率低下和 RNA 產(chǎn)量降低。3.將上述裂解物在 4oC 下以 300×g 離心 2min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的無酶 1.5ml 離心管中用于細(xì)胞質(zhì) RNA 提取，沉淀用于細(xì)胞核 RNA 提取。如果在此過程的后續(xù)步驟中使用相同的離心機(jī)，則保持離心室溫狀態(tài)。上清液含有細(xì)胞質(zhì)提取物。根據(jù)細(xì)胞類型的不同，它通常略帶混濁和黃白色。沉淀含有細(xì)胞核，上清中為細(xì)胞質(zhì)裂解物。4.于步驟 3 種所得細(xì)胞質(zhì)裂解物及細(xì)胞沉淀管中分別加入 600 μl Buffer RT（使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇或 DTT），充分渦旋混勻。若沉淀物較多，可室溫裂解 3-5min，期間搖勻 2-3 次5.將 430μl 無水乙醇（96–100％）分別加入兩管裂解物中，并用移液器將其充分混合。 不要離心。注意：從某些細(xì)胞系純化 RNA 時，加入乙醇后可能會出現(xiàn)沉淀。 這不會影響后續(xù)提取過程。6.將步驟 5 混勻后的兩管溶液轉(zhuǎn)移入無酶吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g（≥10,000rpm）離心 1min，棄廢液，直至將溶液全部轉(zhuǎn)移完成吸附。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續(xù)操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。7.（可選步驟） 向吸附柱中央加入 80μl DNase Ⅰ 工作液，室溫（15℃-25℃）靜置15min。配制 DNase Ⅰ 工作液： 取 10μl DNase Ⅰ儲備液入新的 RNase-Free 離心管中，并加入 70μl Buffer RDD，輕柔混勻。注意：DNase Ⅰ 對物理變性特別敏感，所以混勻時請上下倒置輕柔混勻，切勿渦旋。請確認(rèn) DNase Ⅰ 工作液加入到正中央的柱膜上，否則 DNase 消化效果會不理想。8.向兩個吸附柱中分別加入 700μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心 30s，棄廢液。9.將兩個吸附柱重收套回收集管中，向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認(rèn) Buffer RPE 按要求加入 4 倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心30s，棄廢液。注意區(qū)分細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核 RNA 的吸附柱10. 重復(fù)步驟 9 一次。11. 倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉(zhuǎn)速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱子。12. 將兩個吸附柱分別套入新的 RNase-Free 的 1.5ml 離心管中，并置于無 RNA 酶的環(huán)境中開蓋靜置 5-10min 至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。13. 向兩個吸附柱膜正中央分別加入 30-50μl RNase-Free Water，蓋上蓋子室溫靜置3-5 min。后置于離心機(jī)中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應(yīng)少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應(yīng)置于-80℃儲存。
細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核RNA小量提取試劑盒50T
基本售價：1700.00元
FastPure Cytoplasmic & Nuclear RNA purification Kit HandBookFastPure 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核 RNA 小量提取試劑盒說明書產(chǎn)品組成產(chǎn)品介紹本試劑盒可以快速地從哺乳動物細(xì)胞或組織中提取細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核 RNA，不含酚氯仿等有毒試劑。其提取的總 RNA 純度高，無蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)污染，可用于 RT-PCR、Real Time RT-PCR、mRNA 差異顯示、分子克隆等多種下游實驗。本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RN 置于 2-8℃保存；Buffer RT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇（或DTT）的 Buffer RT 可室溫放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩(wěn)定 12 個月。需要額外準(zhǔn)備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規(guī)購買商業(yè)化商品即為 14.3 M)或 2M DTT? 70%乙醇：RNase-Free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無酶 1.5ml 離心管? 無酶吸頭? 干凈的手套? 高速離心機(jī)? 物理研磨設(shè)備開始前注意事項 請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現(xiàn)配現(xiàn)用），如 1 ml Buffer RT中加入 10μl β-巰基乙醇(或加入 20 μl 的 2 M DTT)。配好的 Buffer RT 可在 4℃維持穩(wěn)定一個月。? Buffer RT 在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? 如果執(zhí)行可選的柱上 DNA 酶消化步驟，請制備 DNase I 儲備液：將 DNase I 干粉（1500 U）溶解在550μl RNase-Free ddH2O 中，輕柔混勻（禁止渦旋），分裝后-20℃貯存（可保存 9 個月）。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細(xì)菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風(fēng)險保證實驗穩(wěn)定性。? RNA 在 Buffer RT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的離心管或玻璃器皿。? RNA 提取操作及離心過程常溫進(jìn)行即可。操作步驟：1.請根據(jù)樣品種類進(jìn)行以下步驟（1a 為動物細(xì)胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細(xì)胞： 懸浮細(xì)胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細(xì)吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細(xì)胞可通過直接裂解法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，待步驟 2 用 Buffer RT裂解）或胰酶處理法（吸盡培養(yǎng)基留下貼壁細(xì)胞，用 PBS 清洗細(xì)胞，吸除 PBS 后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細(xì)胞脫落，加入含有血清的培養(yǎng)基使胰酶失活后轉(zhuǎn)入無酶 1.5ml 離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細(xì)胞數(shù)量不要超過 1×107，收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)基去除干凈，否則會導(dǎo)致步驟 2 時細(xì)胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結(jié)合，RNA 的產(chǎn)量降低。1b. 動物組織勻漿處理： 將 10mg-30mg 動物組織轉(zhuǎn)移入無酶 1.5ml 離心管中并加入600μl Buffer RT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機(jī)將動物組織徹底研磨勻漿。直接進(jìn)行步驟 3.2.加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞沉淀中，并于冰上孵育 5min。對于未消化收集的培養(yǎng)在 3.5cm 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞，可吸凈培養(yǎng)基用 PBS 清洗一次后，直接加入 4℃預(yù)冷的 180μl Buffer RN 至細(xì)胞培養(yǎng)皿中，然后用細(xì)胞刮刀輕輕刮動并轉(zhuǎn)移至無酶 1.5ml 離心管中，并于冰上孵育 5min。對于提前離心沉淀在離心管中的細(xì)胞，通過輕彈離心管以使細(xì)胞沉淀徹底分散開。懸浮液應(yīng)迅速澄清，表明質(zhì)膜立即溶解。注意：細(xì)胞沉淀的不完全分散可能導(dǎo)致裂解效率低下和 RNA 產(chǎn)量降低。3.將上述裂解物在 4oC 下以 300×g 離心 2min。將上清液轉(zhuǎn)移到新的無酶 1.5ml 離心管中用于細(xì)胞質(zhì) RNA 提取，沉淀用于細(xì)胞核 RNA 提取。如果在此過程的后續(xù)步驟中使用相同的離心機(jī)，則保持離心室溫狀態(tài)。上清液含有細(xì)胞質(zhì)提取物。根據(jù)細(xì)胞類型的不同，它通常略帶混濁和黃白色。沉淀含有細(xì)胞核，上清中為細(xì)胞質(zhì)裂解物。4.于步驟 3 種所得細(xì)胞質(zhì)裂解物及細(xì)胞沉淀管中分別加入 600 μl Buffer RT（使用前請檢查 Buffer RT 是否加入 β-巰基乙醇或 DTT），充分渦旋混勻。若沉淀物較多，可室溫裂解 3-5min，期間搖勻 2-3 次5.將 430μl 無水乙醇（96–100％）分別加入兩管裂解物中，并用移液器將其充分混合。 不要離心。注意：從某些細(xì)胞系純化 RNA 時，加入乙醇后可能會出現(xiàn)沉淀。 這不會影響后續(xù)提取過程。6.將步驟 5 混勻后的兩管溶液轉(zhuǎn)移入無酶吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g（≥10,000rpm）離心 1min，棄廢液，直至將溶液全部轉(zhuǎn)移完成吸附。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續(xù)操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。7.（可選步驟） 向吸附柱中央加入 80μl DNase Ⅰ 工作液，室溫（15℃-25℃）靜置15min。配制 DNase Ⅰ 工作液： 取 10μl DNase Ⅰ儲備液入新的 RNase-Free 離心管中，并加入 70μl Buffer RDD，輕柔混勻。注意：DNase Ⅰ 對物理變性特別敏感，所以混勻時請上下倒置輕柔混勻，切勿渦旋。請確認(rèn) DNase Ⅰ 工作液加入到正中央的柱膜上，否則 DNase 消化效果會不理想。8.向兩個吸附柱中分別加入 700μl Buffer RW1，≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心 30s，棄廢液。9.將兩個吸附柱重收套回收集管中，向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認(rèn) Buffer RPE 按要求加入 4 倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm) 離心30s，棄廢液。注意區(qū)分細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核 RNA 的吸附柱10. 重復(fù)步驟 9 一次。11. 倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉(zhuǎn)速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱子。12. 將兩個吸附柱分別套入新的 RNase-Free 的 1.5ml 離心管中，并置于無 RNA 酶的環(huán)境中開蓋靜置 5-10min 至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。13. 向兩個吸附柱膜正中央分別加入 30-50μl RNase-Free Water，蓋上蓋子室溫靜置3-5 min。后置于離心機(jī)中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應(yīng)少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應(yīng)置于-80℃儲存。
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