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ECOTOP
廣州億濤生物科技公司（ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY），由中山大學生命科學領域專業人士和業內專業營銷人才共同組建成立。“持續改善動物及人類健康”是公司的愿景，自成立以來一直潛心研究、注重細節，專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前，ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域，涉及NGS伴隨診斷行業、畜牧行業、水產養殖業、高校科研等行業。
動物組織/細胞總RNA提取試劑盒（單柱法）100T
基本售價：1080.00元
產品介紹本試劑盒可以快速地從動物細胞中提取總 RNA。其提取的總 RNA 純度高（存在基因組 DNA），無蛋白質及其它雜質污染，可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。本產品僅供科研使用，請勿用于醫藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RLT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇的 Buffer RLT 可 4℃放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩定 12 個月。需要額外準備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規購買商業化商品即為 14.3 M)? 70%乙醇：RNase-free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無 RNase 酶的 1.5ml 離心管? 無 RNase 酶的槍頭? 干凈的手套? 高速離心機? 物理研磨設備開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RLT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現配現用），如 1 ml Buffer RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。配好的 Buffer RLT 可在 4℃維持穩定一個月。? Buffer RLT 在儲存時可能會形成沉淀， 如果有沉淀出現，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風險保證實驗穩定性。? RNA 在 Buffer RLT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含 RNase 的無酶離心管或玻璃器皿。操作步驟：1.請根據樣品種類進行以下步驟（1a 為動物細胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細胞：懸浮細胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細胞可通過直接裂解法（吸盡培養基留下貼壁細胞，待步驟 2 用 BufferRLT 裂解）或胰酶處理法（吸盡培養基留下貼壁細胞，用 PBS 清洗細胞，吸除 PBS后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細胞脫落，加入含有血清的培養基使胰酶失活后轉入 1.5ml 無酶離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細胞數量不要超過 1×107，收集細胞時一定要將細胞培養基去除干凈，否則會導致步驟 2 時細胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結合，導致 RNA 的產量降低。2b. 動物組織勻漿裂解處理：將 10mg-30mg 動物組織轉移入 1.5ml 無酶離心管中并加入 600μl Buffer RLT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機將動物組織徹底研磨勻漿。直接進行步驟 3.勻漿時間根據樣本裂解難易程度決定，亦可勻漿后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。2.樣品裂解：對于1a中使用直接裂解法的細胞應在培養皿或培養瓶中直接加入600μlBuffer RLT（使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇）進行細胞裂解，之后將裂解液全部吸入 1.5ml 無酶離心管中進行下一步操作。對于 1a 中使用胰酶處理法的細胞應在無酶離心管中加入 600μl Buffer RLT 渦旋 1min 裂解并進行下一步操作若細胞量少于 5×106 可使用 350μl Buffer RLT。若細胞量較大，可渦旋后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。3.將無酶離心管放入高速離心機以最大轉速(~13,400×g)離心 3min。收集上清入新的1.5ml 無酶離心管中，并加入 1 倍體積的 70%乙醇混勻。如 600μl 溶液則加入 600μl70%乙醇。配制 70%乙醇時請使用 RNase-free water。4.將步驟 3 混勻后的溶液轉移入 RNase-free 吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。5.向吸附柱中加入 700μl Buffer RW1（使用前請確認 Buffer RW1 是否按要求加入0.25 倍體積無水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。6.向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認 Buffer RPE 是否按要求加入 4倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。7.重復步驟 6 一次。8.倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱膜。9.將吸附柱套入新的無酶 1.5ml 離心管管中，并置于無酶的環境中開蓋靜置 5-10min至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。10. 向吸附柱膜正中央加入 50-100μl RNase-free Water，蓋上蓋子室溫靜置 3-5 min。后置于離心機中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應置于-80℃儲存。RNA 純度及濃度檢測純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的 RNA，OD260/OD280 讀數在 1.8-2.1之間，比值為 2.0 是高質量 RNA 的標志。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的 pH 值影響。同一個 RNA 樣品，假定在 10 mM Tris pH7.5 溶液中測出的 OD260/OD280 讀數 1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數則可能在 1.5-1.9 之間，但這并不表示 RNA 不純。濃度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free ddH2O 稀釋 n 倍，用 RNase-free ddH2O 將分光光度計調零，取稀釋液進行 OD260, OD280 測定，按照以下公式進行 RNA 濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數 n)×40
動物組織/細胞總RNA提取試劑盒（單柱法）50T
基本售價：600.00元
產品介紹本試劑盒可以快速地從動物細胞中提取總 RNA。其提取的總 RNA 純度高（存在基因組 DNA），無蛋白質及其它雜質污染，可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。本產品僅供科研使用，請勿用于醫藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RLT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇的 Buffer RLT 可 4℃放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩定 12 個月。需要額外準備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規購買商業化商品即為 14.3 M)? 70%乙醇：RNase-free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無 RNase 酶的 1.5ml 離心管? 無 RNase 酶的槍頭? 干凈的手套? 高速離心機? 物理研磨設備開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RLT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現配現用），如 1 ml Buffer RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。配好的 Buffer RLT 可在 4℃維持穩定一個月。? Buffer RLT 在儲存時可能會形成沉淀， 如果有沉淀出現，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風險保證實驗穩定性。? RNA 在 Buffer RLT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含 RNase 的無酶離心管或玻璃器皿。操作步驟：1.請根據樣品種類進行以下步驟（1a 為動物細胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細胞：懸浮細胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細胞可通過直接裂解法（吸盡培養基留下貼壁細胞，待步驟 2 用 BufferRLT 裂解）或胰酶處理法（吸盡培養基留下貼壁細胞，用 PBS 清洗細胞，吸除 PBS后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細胞脫落，加入含有血清的培養基使胰酶失活后轉入 1.5ml 無酶離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細胞數量不要超過 1×107，收集細胞時一定要將細胞培養基去除干凈，否則會導致步驟 2 時細胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結合，導致 RNA 的產量降低。2b. 動物組織勻漿裂解處理：將 10mg-30mg 動物組織轉移入 1.5ml 無酶離心管中并加入 600μl Buffer RLT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機將動物組織徹底研磨勻漿。直接進行步驟 3.勻漿時間根據樣本裂解難易程度決定，亦可勻漿后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。2.樣品裂解：對于1a中使用直接裂解法的細胞應在培養皿或培養瓶中直接加入600μlBuffer RLT（使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇）進行細胞裂解，之后將裂解液全部吸入 1.5ml 無酶離心管中進行下一步操作。對于 1a 中使用胰酶處理法的細胞應在無酶離心管中加入 600μl Buffer RLT 渦旋 1min 裂解并進行下一步操作若細胞量少于 5×106 可使用 350μl Buffer RLT。若細胞量較大，可渦旋后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。3.將無酶離心管放入高速離心機以最大轉速(~13,400×g)離心 3min。收集上清入新的1.5ml 無酶離心管中，并加入 1 倍體積的 70%乙醇混勻。如 600μl 溶液則加入 600μl70%乙醇。配制 70%乙醇時請使用 RNase-free water。4.將步驟 3 混勻后的溶液轉移入 RNase-free 吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。5.向吸附柱中加入 700μl Buffer RW1（使用前請確認 Buffer RW1 是否按要求加入0.25 倍體積無水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。6.向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認 Buffer RPE 是否按要求加入 4倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。7.重復步驟 6 一次。8.倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱膜。9.將吸附柱套入新的無酶 1.5ml 離心管管中，并置于無酶的環境中開蓋靜置 5-10min至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。10. 向吸附柱膜正中央加入 50-100μl RNase-free Water，蓋上蓋子室溫靜置 3-5 min。后置于離心機中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應置于-80℃儲存。RNA 純度及濃度檢測純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的 RNA，OD260/OD280 讀數在 1.8-2.1之間，比值為 2.0 是高質量 RNA 的標志。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的 pH 值影響。同一個 RNA 樣品，假定在 10 mM Tris pH7.5 溶液中測出的 OD260/OD280 讀數 1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數則可能在 1.5-1.9 之間，但這并不表示 RNA 不純。濃度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free ddH2O 稀釋 n 倍，用 RNase-free ddH2O 將分光光度計調零，取稀釋液進行 OD260, OD280 測定，按照以下公式進行 RNA 濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數 n)×40
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