0.5M EDTA Solution, pH8.0 (Rnase/DNase-free)【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 乙二胺四乙酸(EDTA)是一種能與 Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價金屬離子結合的螯合劑。由于多數核酸酶類和有些蛋白酶類的作用需要 Mg2+,故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制劑;也可用于去除重金屬離子對酶的抑制作用。0.5M EDTA 溶液 pH8.0 是用 0.5M EDTA配制,用 NaOH 調節 pH 值至 8.0。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
0.5M EDTA溶液(pH8.0)使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-80790.5M EDTA Solution, pH8.0100ml/500ml 使用說明書1份【保存條件】室溫保存,有效期1年【概述】乙二胺四乙酸(EDTA)是一種能與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價金屬離子結合的螯合劑。由于多數核酸酶類和有些蛋白酶類的作用需要Mg2+,故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制劑;也可用于去除重金屬離子對酶的抑制作用。0.5M EDTA溶液用NaOH調節pH值至8.0。【注意事項】1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2M Tris-HCl Buffer,pH8.0【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 8.0。 【注意事項】1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.6【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 7.6。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.5【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 7.5。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH7.4【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 7.4。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
2M Tris-HCl Buffer,pH6.8【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 6.8。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
1M Tris-HCl Buffer,pH7.5【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 7.5。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
0.5M Tris-HCl Buffer,pH6.8 【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Tris-HCl 緩沖液用途廣泛,常見于各種分子生物學實驗或相關試劑配制。該產品在 25℃時 pH 為 6.8。 【注意事項】 1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 溫度變化對 Tris-HCl 緩沖液影響較大,溫度每升高 1℃,pH 值降低約 0.03,反之同理。
D-Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (- Ca2+,Mg2+)(- Phenol red)【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物學實驗中最常用的平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于細胞培養取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、以及配制其他試劑等。D-Hank's 與 Hank's 的一個主要區別在于前者不含有鈣和鎂離子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(鈣鎂離子可抑制胰蛋白酶活性)。緩沖液中酚紅起 pH 指示作用。 該 HBSS 緩沖液為即用型,經過濾除菌,可以直接用于細胞培養過程中細胞的洗滌等常規用途,使用前不必再進行稀釋或過濾除菌等任何處理。 【注意事項】 1. HBSS 溶液在使用過程中應該避免微生物污染。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
D-Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (-Ca2+,Mg2+)(+ Phenol red)【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物學實驗中最常用的平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于細胞培養取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、以及配制其他試劑等。D-Hank's 與 Hank's 的一個主要區別在于前者不含有鈣和鎂離子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(鈣鎂離子可抑制胰蛋白酶活性)。緩沖液中酚紅起 pH 指示作用。該 HBSS 緩沖液為即用型,經過濾除菌,可以直接用于細胞培養過程中細胞的洗滌等常規用途,使用前不必再進行稀釋或過濾除菌等任何處理。 【注意事項】 1. HBSS 溶液在使用過程中應該避免微生物污染。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Hanks Balanced Salt Solution,HBSS (+ Ca2+,Mg2+)(+ Phenol red) 【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 Hank's 液是生物學實驗中最常用的平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS),主要用于細胞培養取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、以及配制其他試劑等。 D-Hank's 與 Hank's 的一個主要區別在于前者不含有鈣和鎂離子,因此 D-Hank's 可用于配制胰蛋白酶消化液(鈣鎂離子可抑制胰蛋白酶活性)。緩沖液中酚紅起 pH 指示作用。 該 HBSS 緩沖液為即用型,經過濾除菌,可以直接用于細胞培養過程中細胞的洗滌等常規用途,使用前不必再進行稀釋或過濾除菌等任何處理。 【注意事項】 1. HBSS 溶液在使用過程中應該避免微生物污染。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
10% SDS Solution 【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 SDS 即 Sodium dodecyl sulfate,中文名為十二烷基硫酸鈉。常用生化試劑,用途廣泛,可以用于 SDS-PAGE、細菌堿裂解等。10% SDS 溶液為 100ml 溶液中含有 10g SDS,該溶液用超純水配制,經 022μm 濾膜過濾處理。 【注意事項】 1. 環境溫度較低時,10% SDS 溶液會產生大量白色沉淀,可通過 37℃水浴促溶。 2. 本產品對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
30%丙烯酰胺溶液 (29:1)使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-817430% Acr-Bis Solution (29:1)100ml/500ml使用說明書 1份 【保存條件】 4℃避光保存,有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即為含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例為29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝膠(PAGE膠),包括SDS-PAGE膠等,可以用于蛋白或核酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(acrylamide,簡稱Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,簡稱Bis)在催化劑的作用下,通過自由基引發聚合反應,形成不帶電荷、且具有分子篩性質的網狀結構。其孔徑大小由聚合鏈的長度和交聯度所決定。 聚合鏈的長度與丙烯酰胺濃度有關,交聯度由Acr與Bis的相對比例決定,調節單體丙烯酰胺與交聯劑(Bis)的濃度比例,可形成具有不同交聯度的網狀聚合物。其中Bis的濃度越低,凝膠的孔徑越大,適用于分離較大的分子;Bis的濃度越高,網孔越小,分辨率越高,越有利于分離較小的分子。 【注意事項】 1. 本產品對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Hygromycin B solution 50mg/ml 10ml【保存條件】4℃保存,一年有效【概述】潮霉素 B 是一種氨基糖苷類抗生素,可通過抑制蛋白質合成來對抗細菌,真菌和高級真核生物。潮霉素 B最初是作為抗蠕蟲藥開發的,在研究實驗室中主要用于選擇和維持帶有潮霉素抗性基因的細胞。【操作方法】1. 常用篩選濃度注意:潮霉素 B 用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為 50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動物細胞 50-500μg/mL;細菌/植物細胞 20-200μg/mL;真菌 300-1000μg/mL。2. 殺滅曲線的建立注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇 5 個濃度。1)第一天:未轉化的細胞按照 20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2 培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。2)根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定 50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例將母液稀釋到 5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。3)第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。4)接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養基。5)按照固定的周期(如每 2 天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是 7-10 天)內能夠殺死絕大多數細胞的最低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。3. 穩定轉染細胞的篩選1)轉染 48h 后,用含有適當濃度的潮霉素 B 篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果最好。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過 25%。2)每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養液。3)篩選 7 天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。4)挑取并轉移 5-10 個抗性克隆于 35mm 細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養 7 天。5)之后更換正常培養基培養即可。【注意事項】1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。
ECL Western Blotting Substrate 【保存條件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏發光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶 HRP 的抗體及其關聯的抗原。 用于 HRP 標記抗體的 Western Blot 和 HRP 標記探針的核酸雜交。由于采用了獨特的發光底物 系統,SuperStar ECL 超敏發光液是目前最靈敏的商業化熒光 ECL 檢測試劑(具有極高靈 敏度和高信噪比);可在日光燈下進行發光操作;發光迅速,熒光可使 X 光膠片感光達 12 小時以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000~1:10000), 極其節省抗體。 【特點】 ? 飛克級靈敏度 - 在硝酸纖維素或 PVDF 膜上檢測低至飛克量的目標蛋白量 ? 高信號穩定性 - 孵育印跡在關鍵的 4 小時時間內提供穩定的信號持續時間,在最佳條 件下可產生長達 24 小時的光輸出 ? 穩定的試劑 - 8 小時工作溶液穩定性; 在 4℃下 1 年的試劑盒穩定性 ? 更經濟的抗體用量: 0.2 至 1.0μg/ mL 一抗(從 1 mg / mL 原液中 1:1000 至 1:5000 稀釋) 10 至 50 ng / mL 二級抗體(從 1 mg / mL 原液中 1:20,000 至 1:100,000 稀釋) 【操作方法】 1. 執行常規 SDS-PAGE、轉膜和 Western Blot 步驟。注意用 HRP 標記 lgG 或用一抗-鏈 親和素-生物素-HRP 夾法。2. Western Blot 最后一次洗膜的同時新鮮配制發光工作液:分別取 A:B=1:1 混合(如需要 1ml 發光液則取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合),放入干凈容器中混合。建議立即使用 工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。 3. 用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發光工作液 (0.125ml 發光工作液/cm2 膜)中,與發光工作液充分接觸。室溫孵育 2 分鐘,準備立即壓片 曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促 反應,使用過少的發光工作液不利反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。 為達節約目的可將 膜剪小但勿降低發光液用量。 4. 用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。 5. 打開 X 光膠片暗盒,在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將 Western Blot 膜貼在 保鮮膜上,將保鮮膜折起來完全包裹 Western Blot 膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余 的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋 Western Blot 膜的保鮮膜固定在暗 盒內,蛋白帶面向上。 6. 暗房內壓 X 光膠片,分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。 【注意事項】 1. 步驟 1~5 可在日光燈下操作;但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶 模糊。3. 發光工作液孵育約 2 分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋 白條帶 發光較弱甚至肉眼不可見但可使 X 光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發 光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使 X 光膠片感光,因而弱帶可曝光 1-10 小 時。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 發光和 曝光。4. 由于超敏發光液極其靈敏,強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗 1:1000~1:4000, 二抗 1:2000~1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗。5. 某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光,應選擇高質量保鮮膜。 6. 使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性,回收第二抗體應避免使用 NaN3,如必需使用勿超過 0.01%。
1×PBS緩沖液(無菌)使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8006 1×PBS buffer(pH7.2-7.4) (Sterile,without Ca2+,Mg2+) 500ml 使用說明書 1份 【保存條件】 室溫保存,有效期1年 【概述】 PBS(phosphate buffered solution)即磷酸鹽緩沖液,能夠提供相對穩定的離子環境和pH緩沖能力,是生物學中經常使用的緩沖鹽溶液,用于分子克隆及細胞培養等,pH為7.2-7.4,與人體血液等滲,主要成分為磷酸二氫鉀、氯化鉀、磷酸氫二鈉以及氯化鈉. 本產品為1×工作液,經過除菌處理,可直接使用。 4℃保存可延長產品保質期,長期不用建議低溫保存。 【注意事項】 1. PBS溶液在低溫情況下可能會產生沉淀。如果發現有沉淀產生,請置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2. PBS溶液在使用過程中應該避免微生物污染。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
RNAEx ZOL Reagent 貨號:EK-5301中文名稱:RNAEx ZOL RNA提取試劑(同Thermo的Trizol)規格:200ML應用:RNA提取運輸條件:常溫運輸 【保存條件】 4oC 避光保存一年 【概述】 RNAEx ZOL Reagent 是即用型細胞和組織總 RNA 提取試劑,該試劑是一步法苯酚和異硫氰酸胍解決方案。該試劑可保持樣品 RNA 的完整性,同時破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分享成水相和有機相。RNA 存于水相,通過異丙醇沉淀回收。 此方法可完美應用于少量人類、動物、植物或細菌來源的組織和細胞,允許大量樣本同時處理。整個過程可在一小時內完成,同時可避免蛋白質和 DNA 污染。 【操作方法】 1. 樣品處理: a. 組織:將組織在液氮中研磨,磨碎后及時于每 50-100mg 組織中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent,樣品體積不應超過 RNAEx ZOL Reagent 體積的 10%(或使用勻漿儀器)。 b. 單層細胞:直接在培養皿中裂解細胞,如35mm直徑的培養皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent,使用吸頭吹勻促進細胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的試劑量基于培養的表面積而不是細胞數量(每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent), RNAEx ZOL Reagent試劑量不足可能會導致分離出的 RNA 有 DNA 污染。 c. 懸浮細胞:先低速離心沉淀細胞,棄培養液后加入 RNAEx ZOL Reagen(t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106動物、植物、酵母或細菌細胞中)。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗滌細胞,這容易導致 mRNA 降解。一些酵母和細菌細胞的裂解可能需要使用均質器。 可選:一些樣品可能需要額外的分享步驟,這些樣品蛋白質、脂肪、多糖或細胞外基質含量高,如肌肉、脂肪組織、以及部分植物塊莖。在根據上述方式處理后,于2-8°C,12000g 離心 10 分鐘,移除沉淀不溶物,RNA 存于上清中。 2. 相分離 a. 將加完 RNAEx ZOL Reagent 后的樣品在室溫(15-30°C)靜置 5 分鐘,以利于樣品核蛋白體完全分離 b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿(自備),小心蓋好樣品管后,劇烈震蕩 15 秒,后置于室溫(15-30°C)靜置 2-3 分鐘。 c. 2-8°C,10000g 離心 15 分鐘。離心后,混合物分離為下層(酚-氯仿相)、中間相以及上層無色水相。RNA 存在于上層無色水相中,體積約為最初加入 RNAEx ZOL Reagent 體積的 60%左右。 RNA 分離提取步驟: 1. RNA 沉淀 a. 將上述水相轉移到一個新的管中,并保存有機相(若希望分離 DNA 或蛋白質)。混合異丙醇從水相中沉淀 RNA,每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 異丙醇,室溫(15-30°C)靜置 10 分鐘。 b. 2-8°C,10000g 離心 10 分鐘。離心前看不出 RNA 沉淀,離心后在管側和管底會出現膠狀沉淀即為 RNA 沉淀。 2. RNA 洗滌 a. 棄上清。用 75%乙醇洗滌 RNA 沉淀一次,每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 試劑使用至少 1ml 75%乙醇,渦旋混勻后于 2-8°C,不超過 7500g 離心 5 分鐘,棄上清 3. 溶解 RNA a. 在上述過程結束后,簡單干燥 RNA 沉淀(空氣干燥或真空干燥 5-10 分鐘,不要真空離心離心干燥 RNA)。重要的是不要讓 RNA 沉淀過于干燥,這將大大降低其溶解度。加入 25-200μl 無 RNase 水或 0.5% SDS,用吸頭吹打幾次至溶解,于 50-60°C 放置 10 分鐘使 RNA 徹底溶解(注:若后續進行酶學實驗,請勿使用 0.5% SDS 溶液溶 解)。溶解后置于-80°C 保存。 DNA 分離提取步驟: 1. DNA 沉淀 a. 樣品加入氯仿分層后,移去上層水相提取 RNA,吸取中間層和有機層的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 無水乙醇混勻,室溫靜置 2-3 分鐘,2-8°C 不超過 2000g 離心 5 分鐘以沉淀 DNA。 2. DNA 洗滌 a. 移去苯酚-乙醇上清液(如需要,保存上清用于蛋白質分離,操作見下)。用 0.1M 的檸檬酸鈉溶液(溶于 10%乙醇的檸檬酸鈉溶液)清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 試劑添加 1ml 溶液。每次清洗時,室溫靜置 30 分鐘 DNA沉淀(間歇混勻),2-8°C 2000g 離心 5 分鐘,棄上清。重復一次。 b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀,每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇,室溫放置 10-20 分鐘(間歇混勻),2-8°C 2000g 離心 5 分鐘,棄上清。 c. 室溫放置晾干 DNA 5-15 分鐘,用 8mM NaOH 溶解 DNA。從 50-70mg 組織或 107細胞中分離的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中,濃度常為 0.2-0.3μg/μl。 注:提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 緩沖液中,建議用弱堿溶解,8mM NaOH 的 pH值為 9,NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 調節 PH。從某些樣品(尤其是組織)中提取的 DNA 中可能包含一些膠狀不溶物可用>12000g 離心 10 分鐘除去。 蛋白質分離操作步驟: 1. 蛋白質沉淀 a. 苯酚-乙醇上清液(每 1ml RNAEx ZOL Reagent 試劑上清體積約 0.8ml)中加入異丙醇可沉淀出蛋白質。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 試劑中添加 1.5ml 異丙醇,室溫靜置 10 分鐘,然后 2-8°C 12000g 離心 10 分鐘以沉淀蛋白質,棄上清。 2. 蛋白質洗滌 a. 用 0.3M 鹽酸胍溶液(溶于 95%乙醇)洗滌蛋白質沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 試劑中添加 2ml 0.3M 鹽酸胍溶液。每次洗滌中,室溫靜置 20 分鐘,2-8°C 7500g 離心 5 分鐘,棄上清,重復 3 次。最后清洗后,加入 2ml 無水乙醇,漩渦混勻蛋白沉淀,室溫靜置 20 分鐘,然后 2-8°C 7500g 離心 5 分鐘以沉淀蛋白質,棄上清。 3. 蛋白質溶解 a. 干空干燥蛋白質沉淀 5-10 分鐘,用 1% SDS 溶解蛋白質,反復吹打,50°C 溫浴至完全溶解,不溶物 2-8°C 10000g 離心 10 分鐘去除。分離得到的蛋白質樣品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存(長期保存建議-80°C) 1. RNA 酶污染注意事項: a. 提取過程用品均經過去 RNA 酶處理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小時 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水沖洗并高壓滅菌,吸頭及離心管類盡量使用一次性無酶吸頭及離心管 b. 佩戴手套及口罩及護目鏡:皮膚上常含有細菌和霉菌,可污染 RNA 制備,且同時是RNA 酶來源,同時 RNAEx ZOL Reagent 對皮膚有一定毒性,建議佩戴手套及口罩及護目鏡。 c. 盡量于通風櫥內提取:避免吸入提取過程中有毒物質。 2. 安全性問題: a. 本品在與皮膚接觸及吞咽有毒性,可導致燒傷。與皮膚接觸后,應立即用洗滌劑和大量水沖洗。如感到身體不適,應立即就醫 3. 存儲性問題: a. 實驗已證明 RNAEx ZOL Reagent 室溫下可穩定保存 12 個月,不過依然建議儲存于2-8°C 以保證最佳性能,盡量避光保存。
RNA提取輔助試劑100ml(氯仿替代物),可有效避免氯防購買不到的煩惱可以代替氯仿使用,并且毒性較小。在單步 TRI 試劑方法中使用可以減少 DNA 污染 RNA 的可能性,本品不會對分離的 RNA 的質量或數量產生不利影響。 【操作方法】1. 請按每使用 1ml TRI 試劑(Trizol 試劑或 RNAEx ZOL 總 RNA 提取試劑)加入 200μl 比例來使用(等同RNA 提取中氯仿的使用)。 【注意事項】1. 如果每次的使用量很小,可以適當分裝后再使用,以免污染。2. RNAEx ZOL 總 RNA 提取試劑(貨號:EK-5301)可在 ECOTOP 各平臺咨詢購買。3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作