廣州億濤生物科技公司(ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY),由中山大學生命科學領域專業人士和業內專業營銷人才共同組建成立。“持續改善動物及人類健康”是公司的愿景,自成立以來一直潛心研究、注重細節,專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前,ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域,涉及NGS伴隨診斷行業、畜牧行業、水產養殖業、高校科研等行業。
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit【保存條件】 -20℃保存一年 【使用建議(僅供參考)】 1. 準備溶液:室溫融解試劑盒中的三種試劑,溶解后立即放置在冰上,混勻。取適當量的細 胞漿蛋白抽提試劑 CE I/II 及細胞核蛋白抽提試劑 NE 備用,在使用前數分鐘內加入蛋白酶 抑制劑混合物及 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM(現配現用)。 A: 對于貼壁細胞:用 PBS 洗一遍,用細胞刮子刮下細胞,或用 EDTA 溶液處理細胞使細胞 不再貼壁很緊,并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞,盡最大努力吸盡上清,留下細胞沉 淀備用。(注:盡量避免用胰酶消化細胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。) B: 對于懸浮細胞:用預冷的 PBS 清洗一遍,離心收集細胞,盡最大努力吸盡上清,留下細 胞沉淀備用。 2. 每 20 微升細胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細胞漿蛋白抽提試劑 CE I。(對于 200 萬 HeLa 細胞,其細胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。) 2. 每 20 微升細胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細胞漿蛋白抽提試劑 CE I。(對于 200 萬 HeLa 細胞,其細胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。)3. 最高速劇烈渦旋 5-10 秒,把細胞沉淀完全懸浮并分散開。(如果細胞沉淀沒有完全懸浮并分散開,可以適當延長 vortex 時間。)4. 冰浴 10-15 分鐘。(過程中可適當渦旋 2-3 次)5. 4℃下 3000rpm 轉速下離心 5 分鐘。6. 收集上清液(上清為細胞質提取物,儲存在-80℃或準備加入 Western Blot 實驗中。注意此時沉淀并不致密)7. 將步驟 6 中沉淀重懸于 100 微升細胞漿蛋白抽提試劑 CE II 中。8. 4℃下 3000rpm 轉速下離心 5 分鐘,除去上清液(剩余沉淀為細胞核)。若想更好的清洗細胞核,可重復步驟 7 和步驟 8 一次。9. 向此沉淀物中添加等體積的細胞核蛋白抽提試劑 NE(即,如果沉淀為 40 μL,則添加 40μL NE)10. 將沉淀重懸并在冰上孵育 10 分鐘(過程中可適當渦旋 3-5 次)。11. 在 4℃下以 14,000 rpm 離心 5 分鐘。12. 收獲上清液(這是核提取物)。13. 將提取物儲存在-80℃或準備加入 Western Blot 實驗中。【注意事項】1. 盡量減少反復凍融的次數,以免效率下降。2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
RNA Holder Stabilization Solution【保存條件】 室溫(15-30℃)保存一年 【概述】 RNA holder 是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液,能迅速穩定組織,保護非冷凍細 胞 RNA 于原位。可以快速可靠地保存動物組織、細胞內的 RNA。組織獲取后立即浸入 RNA holder 保存液中,在室溫可以保存 7 天,4℃可以保存 4 周,-20℃、-80℃標本可以長期保存, RNA 穩定存在不降解,取出后用各類方法抽提可以獲得高質量的 RNA。 【操作方法】 1. 根據要保存的各樣本的體積,計算出所需 RNA holder 用量。RNA holder 的用量應當是組 織體積的 10 倍(如 100mg 組織約用 1ml RNA holder);離心收集 2×106 細胞 RNA holder 的用量是 1ml。 2. 將 RNA holder 按需要量分裝入自備保存管中; 3. 快速將較大的組織切成任何一邊最大厚度不大于 0.5cm 大小,然后將組織碎塊放入到 10 倍體積的 RNA holder 中保存。注:組織過厚則 RNA holder 不能有效滲入,組織中間部位的 RNA 不能受到保護。 4. 保存時先將樣本浸入 RNA holder 后置 4℃冰箱過夜(使 RNA holder 完全滲入到組織中), 然后轉移至-20℃冰箱(RNA holder 在-20℃仍為液態,有結晶析出為正常情況),或者過夜 取出后直接轉移至-80℃,可反復凍融 20 次不影響 RNA 質量。 【注意事項】 1. 組織和細胞取材要快速,防止 RNA 降解。冰凍組織不能用 RNA holder 保存,因其不能 有效滲入冰凍組織中。 2. 保存樣品的提取:組織樣本從-20℃或-80℃取出后,復蘇到室溫后,取出組織塊置于 RNA 提取液(如 Trizol)中再行提取。細胞樣本復溫后低速離心收集細胞,去除 RNA holder
Total Exosome Isolation Reagent(from cell culture media) 【保存條件】 4oC 保存,有效期一年 【概述】 外泌體是含有復雜 RNA 和蛋白質的小囊泡(30-120 nm),所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。外泌體被認為是細胞間的信使,在特定細胞之間傳遞其效應物或向大分子發出信號,然而它們的形成、組成以及涉及它們的生物學途徑仍未完全了解。 外泌體功能和運輸的生物學研究要求完整的外泌體的分離,但是目前使用的方法繁瑣,非特異性且困難。ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑為從細胞培養基樣品中濃縮完整外泌體提供了一種簡單而可靠的方法。通過束縛水分子,從細胞培養基中分離總外泌體試劑可將溶解度較低的組分(即外泌體)從溶液中擠出,從而允許它們在短暫,低速離心后收集。ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑可以從細胞培養基樣品中快速高效地富集完整的外泌體。 ?為任何類型的下游應用最大限度地大大提高完整外泌體的回收率 ? 使用簡單可靠的實驗方案輕松分離外泌體 ? 避免耗時的超速離心 ? 靈活性極佳—可以根據樣品量按比例增加或減少 【操作方法】 樣品處理: 1. 收集細胞培養基。 2. 以 2000×g 離心細胞培養基 30 分鐘使細胞和碎屑沉淀。 3. 將不含細胞的上清液轉移至新管中,注意不要吸到管底的細胞及碎屑。 外泌體分離: 1. 從上一步分離的不含細胞的上清液中取所需體積至新管中,并加入 0.5 倍體積的ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑。如 1ml 上清液加入 0.5ml 提取試劑,或10ml 上清液加入 5ml 提取試劑。 2. 將上清液與提取試劑吹打混勻或渦旋混勻。 3. 將混勻好的樣品 2-8℃過夜孵育。 4. 孵育完成后,在 2-8℃條件下 10000×g 離心 1 小時。 5. 完成離心后,吸走并丟棄上清液,外泌體即包含在試管底部的沉淀中(大多數情況 下是不可見的)。 6. 加入合適體積的 1×PBS 或其他類似緩沖液重懸沉淀。具體見下表: 7. 當沉淀重新懸浮之后,所得的外泌體即可進行下游分析或通過親和層析進一步純化。提純后的外泌體可在 2-8℃中保存 1 周或在小于-20℃中長期保存。 【注意事項】 1. 本試劑可室溫保存,4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入細胞或細胞碎片(重要!),合并相同的細胞培養液上清樣品,裝入無菌的玻璃瓶,可在 4℃短期保存(1-2 天),長期保存可凍存于-80℃。 3. 細胞上清分離后盡快進行外泌體分離,保存在 4℃和-80℃,都會對產量有一定的影響。 4. 做少量 WB 實驗一般 1ml 細胞培養上清液或尿液樣本基本足夠,但為了足量分離 外泌體做 RNA 或蛋白質分析,我們推薦使用大于 10ml 樣本量來分離 外泌體。 5. 分離外泌體可用于細胞功能研究或根據后續研究加入相應 Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA 或蛋白質或 1:100 PBS 稀釋行粒徑檢測; 6. 本品僅限用于科研實驗。
Total Exosome Isolation Reagent(from cell culture media) 【保存條件】 4oC 保存,有效期一年 【概述】 外泌體是含有復雜 RNA 和蛋白質的小囊泡(30-120 nm),所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。外泌體被認為是細胞間的信使,在特定細胞之間傳遞其效應物或向大分子發出信號,然而它們的形成、組成以及涉及它們的生物學途徑仍未完全了解。 外泌體功能和運輸的生物學研究要求完整的外泌體的分離,但是目前使用的方法繁瑣,非特異性且困難。ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑為從細胞培養基樣品中濃縮完整外泌體提供了一種簡單而可靠的方法。通過束縛水分子,從細胞培養基中分離總外泌體試劑可將溶解度較低的組分(即外泌體)從溶液中擠出,從而允許它們在短暫,低速離心后收集。ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑可以從細胞培養基樣品中快速高效地富集完整的外泌體。 ?為任何類型的下游應用最大限度地大大提高完整外泌體的回收率 ? 使用簡單可靠的實驗方案輕松分離外泌體 ? 避免耗時的超速離心 ? 靈活性極佳—可以根據樣品量按比例增加或減少 【操作方法】 樣品處理: 1. 收集細胞培養基。 2. 以 2000×g 離心細胞培養基 30 分鐘使細胞和碎屑沉淀。 3. 將不含細胞的上清液轉移至新管中,注意不要吸到管底的細胞及碎屑。 外泌體分離: 1. 從上一步分離的不含細胞的上清液中取所需體積至新管中,并加入 0.5 倍體積的ECOTOP 細胞培養基上清外泌體提取試劑。如 1ml 上清液加入 0.5ml 提取試劑,或10ml 上清液加入 5ml 提取試劑。 2. 將上清液與提取試劑吹打混勻或渦旋混勻。 3. 將混勻好的樣品 2-8℃過夜孵育。 4. 孵育完成后,在 2-8℃條件下 10000×g 離心 1 小時。 5. 完成離心后,吸走并丟棄上清液,外泌體即包含在試管底部的沉淀中(大多數情況 下是不可見的)。 6. 加入合適體積的 1×PBS 或其他類似緩沖液重懸沉淀。具體見下表: 7. 當沉淀重新懸浮之后,所得的外泌體即可進行下游分析或通過親和層析進一步純化。提純后的外泌體可在 2-8℃中保存 1 周或在小于-20℃中長期保存。 【注意事項】 1. 本試劑可室溫保存,4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入細胞或細胞碎片(重要!),合并相同的細胞培養液上清樣品,裝入無菌的玻璃瓶,可在 4℃短期保存(1-2 天),長期保存可凍存于-80℃。 3. 細胞上清分離后盡快進行外泌體分離,保存在 4℃和-80℃,都會對產量有一定的影響。 4. 做少量 WB 實驗一般 1ml 細胞培養上清液或尿液樣本基本足夠,但為了足量分離 外泌體做 RNA 或蛋白質分析,我們推薦使用大于 10ml 樣本量來分離 外泌體。 5. 分離外泌體可用于細胞功能研究或根據后續研究加入相應 Trizol 或蛋白裂解液抽提RNA 或蛋白質或 1:100 PBS 稀釋行粒徑檢測; 6. 本品僅限用于科研實驗。
Cell Counting Kit-8 【保存條件】4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存兩年有效。【概述】Cell Counting Kit-8 試劑盒簡稱 CCK-8 試劑盒,可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。該試劑主要用途有:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。【使用方法(僅供參考)】1. 用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量。通常細胞增殖實驗每孔加入 100μl 2×103個細胞,細胞毒性實驗每孔加入 100μl 5×103個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定,推薦進行預實驗選擇合適的細胞數量)。按照實驗需要,進行培養并給予 0-10μl 特定的藥物刺激。2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培養體積為 200μl,則需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情況以此類推)。可以用加了相應體積細胞培養液和 CCK-8 溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8 溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。3. 在細胞培養箱內(37°C)繼續孵育 0.5-4 小時,對于大多數情況孵育 1 小時即可。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在 0.5、1、2 和 4 小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續實驗。4. 在 450nm 測定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之間的濾光片,但是 450 nm 濾光片的檢測靈敏度最高。5. 計算方法細胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:實驗孔(含有細胞的培養基、CCK-8、待測物質)Ac:對照孔(含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測物質)Ab:空白孔(不含細胞和待測物質的培養基、CCK-8)【注意事項】1. 初次實驗可選擇 3-5 個孔進行預實驗選擇合適的細胞數量。2. 由于使用 96 孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問題。一方面,由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的 PBS、水或培養液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。3. 當有還原性物質存在時會影響 CCK- 8 的測定,增加 OD 值;在有氧化性物質存在時會抑制測定反應的發生,減小 OD 值;在有酚紅存在的情況下,會增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可。4. 在做加藥實驗時,如果藥物具有還原性,就會和 CCK- 8 試劑發生顯色反應,增加吸光度。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入 CCK- 8,測定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加 CCK- 8 之前更換培養基,去掉藥物的影響。5. 如果測定的 OD 值太低可適當增加細胞數量或延長加入 CCK-8 溶液后的染色時間。6. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。7. 僅用于實驗室,不適合農業/家庭/臨床用途使用。8. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
開學季活動,買二贈一,數量有限,送完即止,先到先得 【保存條件】 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存兩年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8 試劑盒簡稱 CCK-8 試劑盒,可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。該試劑主要用途有:藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。 【使用方法(僅供參考)】 1. 用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量。通常細胞增殖實驗每孔加入 100μl 2×103個細胞,細胞毒性實驗每孔加入 100μl 5×103個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定,推薦進行預實驗選擇合適的細胞數量)。按照實驗需要,進行培養并給予 0-10μl 特定的藥物刺激。 2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液(如果起始的培養體積為 200μl,則需加入 20μl CCK-8 溶液,其它情況以此類推)。可以用加了相應體積細胞培養液和 CCK-8 溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8 溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。 3. 在細胞培養箱內(37°C)繼續孵育 0.5-4 小時,對于大多數情況孵育 1 小時即可。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在 0.5、1、2 和 4 小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續實驗。 4. 在 450nm 測定吸光度。可以使用吸光度在 430-490nm 之間的濾光片,但是 450 nm 濾光片的檢測靈敏度最高。 5. 計算方法 細胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:實驗孔(含有細胞的培養基、CCK-8、待測物質) Ac:對照孔(含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測物質) Ab:空白孔(不含細胞和待測物質的培養基、CCK-8) 【注意事項】 1. 初次實驗可選擇 3-5 個孔進行預實驗選擇合適的細胞數量。 2. 由于使用 96 孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發問題。一方面,由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的 PBS、水或培養液;另一方面,可以把 96 孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。 3. 當有還原性物質存在時會影響 CCK- 8 的測定,增加 OD 值;在有氧化性物質存在時會抑制測定反應的發生,減小 OD 值;在有酚紅存在的情況下,會增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可。 4. 在做加藥實驗時,如果藥物具有還原性,就會和 CCK- 8 試劑發生顯色反應,增加吸光度。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入 CCK- 8,測定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基 (只加 CCK-8) 的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加 CCK- 8 之前更換培養基,去掉藥物的影響。 5. 如果測定的 OD 值太低可適當增加細胞數量或延長加入 CCK-8 溶液后的染色時間。 6. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。 7. 僅用于實驗室,不適合農業/家庭/臨床用途使用。 8. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit【保存條件】2-8℃保存,有效期 1 年【概述】臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒(Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit),是利用正常的健康細胞能夠排斥臺盼藍,而喪失細胞膜完整性的細胞可以被臺盼藍染色研制而成。嚴格來說,臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性,通常認為細胞膜喪失完整性,即可認為細胞已死亡。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照后計數,就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。臺盼藍染色只需 3-5 分鐘即可完成,并且操作非常簡單。本試劑盒足夠檢測 100 個細胞樣品。【使用建議(僅供參考)】1. 收集細胞:對于貼壁細胞先用胰酶和/或 EDTA 消化下細胞。對于懸浮細胞,則可以直接收集細胞。把收集的細胞在 1000-2000g 離心 1 分鐘,棄上清,用 1 毫升或根據細胞的量用適當細胞重懸液重新懸起細胞。2.臺盼藍染色:吸取 100 微升重懸的細胞到一塑料離心管內,加入 100 微升臺盼藍染色液(2X),輕輕混勻,染色 3 分鐘(染色 3 分鐘時間已經足夠,染色時間可以更長一些,但不宜超過 10分鐘)。注:對于重懸于細胞培養液中的細胞,也可以直接加入等體積的臺盼藍染色液(2X)進行染色。3.計數:吸取少量經過染色的細胞,用血細胞計數板計數。通常如果要比較精確地進行定量,每個細胞樣品至少數 500 個細胞,數出藍色細胞和細胞總數。細胞存活率=(細胞總數-藍色細胞數)/細胞總數×100%【注意事項】1. 本試劑盒提供的兩種溶液都是無菌的,使用時最好在超凈臺內進行,避免細菌污染。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 本產品長時間存放可能會出現少量顆粒狀沉淀,可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。4. 臺盼藍對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。5. 該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)
SDS-PAGE Gel Preparation Kit產品介紹SDS-PAGE 蛋白電泳制膠試劑盒提供了配制 SDS-PAGE 凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制 PAGE 膠(即聚丙烯酰胺凝膠)。SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒不僅可用于配制 SDS-PAGE凝膠,也可用于配制非變性(native)PAGE 凝膠。本試劑盒約可配制 30-50 塊常規大小的 PAGE 膠存儲條件1M Tris-HCl pH8.8、10% SDS、凝膠聚合催化劑(粉末狀態)和 1M Tris-HCl pH6.8 室溫保存。30% Acr-Bis(29:1)和 TEMED 4℃避光保存。凝膠聚合催化劑加水配制成 10%溶液后,分裝成小管-20℃保存,通常半年內有效(建議分次稱量配制)。需要額外準備的材料□ 制膠器具□ 去離子水開始前試劑準備? 使用前應配制新鮮的 10%凝膠聚合催化劑溶液,且在-20℃分裝凍存。最優是分批使用前配制,盡量不要一次全部配制使用。
Bradford Protein Assay Kit 【包裝規格】 【保存條件】 BSA 存于-20℃,其它試劑 4℃保存穩定 12 個月。【概述】考馬斯亮蘭 G-250 染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 變為 595nm,在一定的濃度范圍內,測定的吸光度值 A595 與蛋白質濃度成正比。Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,樣品中巰基乙醇的濃度可高達 1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達 5mM,但受略高濃度的去垢劑影響,需確保SDS 的濃度低于 0.1%,Triton X-100 低于 0.1%,Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。【使用方法】1. 蛋白標準液的準備a. 蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,如果蛋白樣品所在溶液不含有干擾本試劑盒檢測的物質,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀釋標準品。蛋白標準液(5mg/ml BSA)如果凍存,請完全融化并混勻后使用。b. 按照下表配制 0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml 蛋白標準。每次稀釋時注意充分混勻。如果有必要可以增加設置 0.0625mg/ml 的蛋白標準。2. 蛋白濃度測定a. 取 5μl 不同濃度蛋白標準加到 96 孔板的蛋白標準孔中。b. 取 5μl 樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 5μl,需加標準品稀釋液補足到 5μl。請注意記錄樣品體積。c. 各孔加入 250μl G250 染色液。d. 用酶標儀測定 A595,或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。可以立即測定吸光度,也可以在 2 小時內測定,2 小時內檢測數據無顯著變化。e. 根據標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品中的蛋白濃度。【注意事項】1. 本品 BSA 因每次使用量較小,推薦分裝使用。2. 不同 96 板的吸收值會有不同,得到 OD 有區別為正常現象(保證數據呈線性關系)3. 請使用 96 孔底部透明板(如普通細胞培養板)檢測,最佳波長為 595nm。4. 將 G250 染色液回復至室溫后使用,有利于提高檢測靈敏度。5. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
BCA Protein Assay Kit 【保存條件】 BCA 試劑 A 室溫避光保存 1 年 BCA 試劑 B 室溫保存 1 年 蛋白標準品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測方法之 一 BCA 法研制而成, 實現了蛋白濃度測定的簡單、高穩定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高,檢測濃 度下限達到 25μg/ml,最小檢測蛋白量達到 0.5μg,待測樣品體積為 1-20μl。在 50-2000μg/ml 濃度范圍內有 較好的線性關系。 BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,可以兼容樣品中高達 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保 EDTA 低于 10mM,無 EGTA,二硫蘇糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不適用 BCA 法時建議試用本司生產的 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依據樣品數量,將試劑 A 和試劑 B 按體積比 50:1 配制適量 BCA 工作液,并充分混勻。 注:配制 BCA 工作液前請將試劑 A 搖晃混勻,觀察是否析出結晶,如若析出結晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀釋蛋白標準品: 蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,如果蛋白樣品所在溶液不含有 干擾本試劑盒檢測的物質,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀釋標準品。蛋白標準液(5mg/ml BSA)如果凍存,請完全融化并混勻后使用。具體如下表:3.蛋白濃度的檢測a. 取 5μl 不同濃度蛋白標準加到 96 孔板的蛋白標準孔中。b. 取 5μl 樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 5μl,需加標準品稀釋液補足到 5μl。請注意記錄樣品體積。c. 各孔加入 195μl BCA 工作液。 37℃放置 30 分鐘。注:也可以室溫放置 2 小時,或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫 度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。d. 用酶標儀測定 A595,或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。可以立即測定吸光度,也可以在 2小時內測定,2 小時內檢測數據無顯著變化。4.數據計算a.以不同濃度的蛋白標準液為橫坐標b. 以不同濃度的蛋白標準測得 OD 值(多孔則為平均 OD)為縱坐標c. 建立線性關系,獲得公式(如右圖中所示(本產品實際檢測),若測得樣品 OD=0.6 則 0.6=0.4995x+0.4151,計算得濃度 x=0.37mg/ml)【注意事項】1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值會有不同,得到 OD 有區別為正常現象(保證數據呈線性關系)。3. 蛋白標準液(5mg/ml)收到后盡快分裝,避免反復凍融。4. BCA 試劑 A 在低溫環境下會析出結晶,可適當 37℃水浴促溶后使用。5. 請使用 96 孔底部透明板(如普通細胞培養板)檢測,最佳波長為 595nm。
BCA Protein Assay Kit 【保存條件】 BCA 試劑 A 室溫避光保存 1 年 BCA 試劑 B 室溫保存 1 年 蛋白標準品-20℃保存 1 年 【概述】 BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測方法之 一 BCA 法研制而成, 實現了蛋白濃度測定的簡單、高穩定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高,檢測濃 度下限達到 25μg/ml,最小檢測蛋白量達到 0.5μg,待測樣品體積為 1-20μl。在 50-2000μg/ml 濃度范圍內有 較好的線性關系。 BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,可以兼容樣品中高達 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保 EDTA 低于 10mM,無 EGTA,二硫蘇糖醇(DTT) 低于 1mM,β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不適用 BCA 法時建議試用本司生產的 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。 【操作方法】 1.配制 BCA 工作液: 依據樣品數量,將試劑 A 和試劑 B 按體積比 50:1 配制適量 BCA 工作液,并充分混勻。 注:配制 BCA 工作液前請將試劑 A 搖晃混勻,觀察是否析出結晶,如若析出結晶,可 37℃水浴促溶。 2.稀釋蛋白標準品: 蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,如果蛋白樣品所在溶液不含有 干擾本試劑盒檢測的物質,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀釋標準品。蛋白標準液(5mg/ml BSA)如果凍存,請完全融化并混勻后使用。具體如下表:3.蛋白濃度的檢測a. 取 5μl 不同濃度蛋白標準加到 96 孔板的蛋白標準孔中。b. 取 5μl 樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 5μl,需加標準品稀釋液補足到 5μl。請注意記錄樣品體積。c. 各孔加入 195μl BCA 工作液。 37℃放置 30 分鐘。注:也可以室溫放置 2 小時,或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫 度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。d. 用酶標儀測定 A595,或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。可以立即測定吸光度,也可以在 2小時內測定,2 小時內檢測數據無顯著變化。4.數據計算a.以不同濃度的蛋白標準液為橫坐標b. 以不同濃度的蛋白標準測得 OD 值(多孔則為平均 OD)為縱坐標c. 建立線性關系,獲得公式(如右圖中所示(本產品實際檢測),若測得樣品 OD=0.6 則 0.6=0.4995x+0.4151,計算得濃度 x=0.37mg/ml)【注意事項】1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 不同 96 板的吸收值會有不同,得到 OD 有區別為正常現象(保證數據呈線性關系)。3. 蛋白標準液(5mg/ml)收到后盡快分裝,避免反復凍融。4. BCA 試劑 A 在低溫環境下會析出結晶,可適當 37℃水浴促溶后使用。5. 請使用 96 孔底部透明板(如普通細胞培養板)檢測,最佳波長為 595nm。
10% SDS Solution 【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 SDS 即 Sodium dodecyl sulfate,中文名為十二烷基硫酸鈉。常用生化試劑,用途廣泛,可以用于 SDS-PAGE、細菌堿裂解等。10% SDS 溶液為 100ml 溶液中含有 10g SDS,該溶液用超純水配制,經 022μm 濾膜過濾處理。 【注意事項】 1. 環境溫度較低時,10% SDS 溶液會產生大量白色沉淀,可通過 37℃水浴促溶。 2. 本產品對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
30%丙烯酰胺溶液 (29:1)使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-817430% Acr-Bis Solution (29:1)100ml/500ml使用說明書 1份 【保存條件】 4℃避光保存,有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即為含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例為29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝膠(PAGE膠),包括SDS-PAGE膠等,可以用于蛋白或核酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(acrylamide,簡稱Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,簡稱Bis)在催化劑的作用下,通過自由基引發聚合反應,形成不帶電荷、且具有分子篩性質的網狀結構。其孔徑大小由聚合鏈的長度和交聯度所決定。 聚合鏈的長度與丙烯酰胺濃度有關,交聯度由Acr與Bis的相對比例決定,調節單體丙烯酰胺與交聯劑(Bis)的濃度比例,可形成具有不同交聯度的網狀聚合物。其中Bis的濃度越低,凝膠的孔徑越大,適用于分離較大的分子;Bis的濃度越高,網孔越小,分辨率越高,越有利于分離較小的分子。 【注意事項】 1. 本產品對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
ECOTOP生產的蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(Hematoxylin and Eosin Staining Kit)綜合了多種經典的HE染色方法,例如Harris法、Mayer法等,簡化了操作步驟,縮短了操作時間,并且染色液內不使用汞、甲醇等有毒試劑。可以用于組織切片或培養細胞的染色。蘇木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被稱作蘇木精染色,是最常用的組織和細胞的染色方法之一。無色的蘇木素(hematoxylin)氧化后形成有醌環結構(quinoid ring)的氧化蘇木素(hematein or haematein),從而可以和三價的鋁離子、鐵離子等形成有顏色的帶正電荷的復合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化蘇木素(也稱氧化蘇木精)和鋁離子等形成有色的復合物的過程也被稱為Dye Lake Formation。細胞核內基因組DNA的雙螺旋結構中,雙鏈上的磷酸基團向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的氧化蘇木素復合物結合,從而形成細胞核染色。蘇木素染色液有多種不同的配制方法,不同的方法可以把細胞核染色成不同深淺的藍色或藍紫色。伊紅(eosin)是一種化學合成的酸性染料,在水中解離成帶負電荷的陰離子,可以和蛋白質氨基上帶正電荷的陽離子結合,從而使細胞胞漿染成不同程度的紅色或粉紅色,與蘇木素染色液染色形成的藍色細胞核形成鮮明對比,從而使蘇木素伊紅(HE)染色成為病理組織切片中最廣泛使用的一種常規染色方法。蘇木素伊紅染色后細胞核呈現藍色,細胞漿呈現粉紅色或紅色。
Hygromycin B solution 50mg/ml 10ml【保存條件】4℃保存,一年有效【概述】潮霉素 B 是一種氨基糖苷類抗生素,可通過抑制蛋白質合成來對抗細菌,真菌和高級真核生物。潮霉素 B最初是作為抗蠕蟲藥開發的,在研究實驗室中主要用于選擇和維持帶有潮霉素抗性基因的細胞。【操作方法】1. 常用篩選濃度注意:潮霉素 B 用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為 50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動物細胞 50-500μg/mL;細菌/植物細胞 20-200μg/mL;真菌 300-1000μg/mL。2. 殺滅曲線的建立注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇 5 個濃度。1)第一天:未轉化的細胞按照 20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2 培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。2)根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定 50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例將母液稀釋到 5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。3)第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。4)接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養基。5)按照固定的周期(如每 2 天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是 7-10 天)內能夠殺死絕大多數細胞的最低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。3. 穩定轉染細胞的篩選1)轉染 48h 后,用含有適當濃度的潮霉素 B 篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果最好。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過 25%。2)每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養液。3)篩選 7 天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。4)挑取并轉移 5-10 個抗性克隆于 35mm 細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養 7 天。5)之后更換正常培養基培養即可。【注意事項】1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。
【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 5×SDS-PAGE 雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE 運行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動引起的 pH 變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS 還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT 可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyroninY),用于在 Western 印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。 【使用建議】 1. 室溫或 37℃水浴解凍 5×SDS-PAGE 雙色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。2. 請按每 40μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(5 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可【注意事項】 1. DTT 對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。2. 該產品于-20℃保存時會出現 SDS 沉淀,使用前請確保溶液完全復溶混勻,有必要時可置于 37℃水浴促溶。3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在 30kd 左右, 膠濃度為 12%時,約在 20kd 左右,膠濃度為 15%時,大概在 10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的 SDS 聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。6. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。