廣州億濤生物科技公司(ECOTOP SCIENTIFIC(Guangzhou) BIOTECHNOLOGY),由中山大學生命科學領域專業人士和業內專業營銷人才共同組建成立。“持續改善動物及人類健康”是公司的愿景,自成立以來一直潛心研究、注重細節,專注于打造高品質、標準化的生物相關產品。目前,ECOTOP SCIENTIFIC產品線涵蓋了分子生物學、細胞生物學、免疫學等領域,涉及NGS伴隨診斷行業、畜牧行業、水產養殖業、高校科研等行業。
5% Milk Blocking Buffer【保存條件】 -20℃保存,有效期 1 年;4℃保存,有效期 1 個月。 【概述】 Western Blot 封閉液(Western Blot Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及 免疫組化實驗中非特異性蛋白結合位點的封閉。封閉后,可以減小后續的一抗或二抗等和載 體的非特異性結合,降低背景,增強信噪比,以達到理想的顯色效果。 【使用建議】 本產品為即用型,無需稀釋。封閉步驟中加入足夠量的封閉液充分覆蓋載體表面,振蕩封閉,封閉時間依據實驗而定,一般室溫封閉半小時至 1 小時,然后進行抗體孵育等后續 操作。 【注意事項】 1. 封閉液可 4℃保存,但容易染菌,如需長期保存,請放置于-20℃。 2. 通常在室溫封閉 60 分鐘即可。對于一些背景非常高的抗體,可以 4℃封閉過夜。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5% BSA Blocking Buffer【保存條件】 4℃保存,有效期 6 個月;-20℃保存,有效期 1 年 【概述】 5%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結合位點的封閉。封閉后,可以減小后續的一抗或二抗等和載體的非特異性結合,降低背景,增強信噪比,以達到理想的顯色效果。 【使用建議】 本產品為即用型,無需稀釋。封閉步驟中加入足夠量的 BSA 封閉液充分覆蓋載體表面, 振蕩封閉,封閉時間依據實驗而定,一般室溫封閉半小時至 1 小時,然后進行抗體孵育等 后續操作。 【注意事項】 1. 封閉液可 4℃保存,但容易染菌,如需長期保存,請放置于-20℃。 2. 通常在室溫封閉 60 分鐘即可。對于一些背景非常高的抗體,可以 4℃封閉過夜。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
1% BSA Blocking Buffer【保存條件】 -20℃保存,有效期 1 年 【概述】 1%BSA 封閉液(Blocking Buffer)適用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結合位點的封閉。封閉后,可以減小后續的一抗或二抗等和載體的非特異性結合,降低背景,增強信噪比,以達到理想的顯色效果。 【使用建議】 本產品為即用型,無需稀釋。封閉步驟中加入足夠量的 BSA 封閉液充分覆蓋載體表面, 振蕩封閉,封閉時間依據實驗而定,一般室溫封閉半小時至 1 小時,然后進行抗體孵育等 后續操作。 【注意事項】 1. 封閉液可 4℃保存,但容易染菌,如需長期保存,請放置于-20℃。 2. 通常在室溫封閉 60 分鐘即可。對于一些背景非常高的抗體,可以 4℃封閉過夜。 3. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
1×Ponceau S Solution【保存條件】 ℃保存,有效期 1 年 【概述】 麗春紅(Ponceau S)也稱猩紅,可以用于 PVDF 膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合,同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區相結合,從而形成紅色的條帶。 麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。麗春紅對蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸餾水,PBS 或其它適宜的溶液洗去。 本試劑使用方便,本底低,靈敏度較高,對蛋白的檢測下限是 250ng。 【使用建議】 1. 將 PVDF 膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒在 1×麗春紅染色液中,搖動 3-5 分鐘 或更長時間,直至出現清晰條帶。對結果作適當記錄。 2. 用蒸餾水,PBS 或其它適當溶液漂洗 2-3 次,每次 3-5 分鐘,去除麗春紅,進行后續的 Western 檢測。 【注意事項】 1. 麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
40% Acr-Bis Solution (37.5:1)【保存條件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 40% Acr-Bis Solution (37.5:1) 即為含 40% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例為 37.5:1。 40% Acr-Bis Solution (37.5:1) 常用于配制丙烯酰胺凝膠(PAGE 膠),包括 SDS-PAGE 膠 等,可以用于蛋白或核酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(acrylamide,簡稱 Acr) 和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,簡稱 Bis)在催化劑的作用下,通過自由基引發聚合反應,形成不帶電荷、且具有分子篩性質的網狀結構。其孔徑大小由聚合鏈的長度和交 聯度所決定。 聚合鏈的長度與丙烯酰胺濃度有關,交聯度由 Acr 與 Bis 的相對比例決定,調節單體丙烯酰胺與交聯劑(Bis)的濃度比例,可形成具有不同交聯度的網狀聚合物。其中 Bis 的濃度越低,凝膠的孔徑越大,適用于分離較大的分子;Bis 的濃度越高,網孔越小,分辨率越高,越有利于分離較小的分子。 【注意事項】 1. 本產品對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
40% Acr-Bis Solution (19:1)【保存條件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 40% Acr-Bis Solution (19:1) 即為含 40% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例為 19:1。 40% Acr-Bis Solution (19:1) 常用于配制丙烯酰胺凝膠(PAGE 膠),包括 SDS-PAGE 膠等, 可以用于蛋白或核酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(acrylamide,簡稱 Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,簡稱 Bis)在催化劑的作用下,通過自由基引發聚合 反應,形成不帶電荷、且具有分子篩性質的網狀結構。其孔徑大小由聚合鏈的長度和交聯度所決定。 聚合鏈的長度與丙烯酰胺濃度有關,交聯度由 Acr 與 Bis 的相對比例決定,調節單體丙烯酰胺與交聯劑(Bis)的濃度比例,可形成具有不同交聯度的網狀聚合物。其中 Bis 的濃度越低,凝膠的孔徑越大,適用于分離較大的分子;Bis 的濃度越高,網孔越小,分辨率越 高,越有利于分離較小的分子。 【注意事項】 1. 本產品對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
30% Acr-Bis Solution (37.5:1)【保存條件】 4℃避光保存,有效期 1 年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (37.5:1) 即為含 30% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液,其中 acrylamide 和 bisacrylamide 的比例為 37.5:1。 30% Acr-Bis Solution (37.5:1) 常用于配制丙烯酰胺凝膠(PAGE 膠),包括 SDS-PAGE 膠 等,可以用于蛋白或核酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(acrylamide,簡稱 Acr) 和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,簡稱 Bis)在催化劑的作用下,通過自由基引發 聚合反應,形成不帶電荷、且具有分子篩性質的網狀結構。其孔徑大小由聚合鏈的長度和交聯度所決定。 聚合鏈的長度與丙烯酰胺濃度有關,交聯度由 Acr 與 Bis 的相對比例決定,調節單體丙烯酰胺與交聯劑(Bis)的濃度比例,可形成具有不同交聯度的網狀聚合物。其中 Bis 的濃 度越低,凝膠的孔徑越大,適用于分離較大的分子;Bis 的濃度越高,網孔越小,分辨率越高,越有利于分離較小的分子。 【注意事項】 1. 本產品對人體有毒,操作時請特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體 內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE Separating Gel Buffer,4×(pH 8.8)【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 本試劑是由 Tris 和 SDS 混合而成的,主要用于 SDS-PAGE 凝膠(變性聚丙烯酰胺凝膠) 制備實驗。配制濃縮膠時,10ml 制膠體系中加入 2.5ml(4 倍稀釋)。 【使用建議】 根據目標蛋白分子量選取凝膠濃度,按下表配制。先配分離膠,再配濃縮膠。 表格僅供參考,具體添加量根據所需凝膠溶液總體積將 4×SDS-PAGE 分離膠緩沖液稀釋成 1×即可。【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE spacer Gel Buffer,4×(pH 6.8)【保存條件】 室溫保存,有效期 1 年 【概述】 本試劑是由 Tris 和 SDS 混合而成的,主要用于 SDS-PAGE 凝膠(變性聚丙烯酰胺凝膠) 制備實驗。配制濃縮膠時,10ml 制膠體系中加入 2.5ml(4 倍稀釋)。 【使用建議】 根據目標蛋白分子量選取凝膠濃度,按下表配制。先配分離膠,再配濃縮膠。 表格僅供參考,具體添加量根據所需凝膠溶液總體積將 4×SDS-PAGE 濃縮膠緩沖液稀釋成 1×即可。【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Native-PAGE loading buffer,4×【保存條件】 -20℃保存,有效期 1 年 【概述】 4×非變性蛋白上樣緩沖液中不含 SDS 及 DTT 或者β-巰基乙醇,適合于常規的非變性 PAGE 蛋白樣品的電泳。內含溴酚藍作為電泳進度追蹤染料。 【使用建議】 1. 室溫解凍 4×非變性蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每 10μl 蛋白樣品加入 30μl 上樣緩沖液的比例(4 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后直接上樣電泳。 4. 通常電泳時藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 電泳時作蛋白質上樣用。其主要成份為 SDS,DTT,考馬斯亮藍,緩沖鹽溶液等。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除 了各種蛋白質本身電荷的差異,SDS 還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子 的二級和三級結構,DTT 可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了 蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子 量大小有關。考馬斯亮藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液。 2. 請按每 10μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT 對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 電泳時作蛋白質上樣用。其主要成份為 SDS,DTT,考馬斯亮藍,緩沖鹽溶液等。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除 了各種蛋白質本身電荷的差異,SDS 還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子 的二級和三級結構,DTT 可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了 蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子 量大小有關。考馬斯亮藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液。 2. 請按每 10μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT 對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
Tris-Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer,2×(with DTT)【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液 (含 DTT)用于 Tricine-SDS-PAGE 電泳時作蛋白質上樣用。其主要成份為 SDS,DTT,考馬斯亮藍,緩沖鹽溶液等。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除 了各種蛋白質本身電荷的差異,SDS 還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子 的二級和三級結構,DTT 可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了 蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子 量大小有關。考馬斯亮藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液。 2. 請按每 10μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT 對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
SDS-PAGE Loading buffer,4×(with β-Mercaptoethanol)【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期 1 年 【概述】 4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在 SDS-PAGE 運行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動引起 的 pH 變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中 以及電泳過程中蛋白質降解。SDS 可與蛋白質結合使蛋白質-SDS 復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS 還 可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。β-巰基乙醇可以斷開 半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 溴酚藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫解凍 4×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每 30μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(4 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。【注意事項】 1. β-巰基乙醇對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在 30kd 左右, 膠濃度為 12時,約在 20kd 左右,膠濃度為 15%時,大概在 10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液 可能會呈現深棕色,不影響產品使用。
2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-8154SDS-PAGE Loading buffer,2×(with DTT)10ml/100ml 使用說明書1份【保存條件】建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年【概述】2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。溴酚藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。【使用建議】1. 室溫解凍2×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液。2. 請按每10μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。【注意事項】1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。
4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書 【包裝規格】 產品編號 產品名稱 包裝 ES-8153 SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT) 1ml/10ml/100ml 使用說明書 1份 【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年 【概述】 4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。 【使用建議】 1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。 2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。
4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)使用說明書【包裝規格】產品編號產品名稱包裝ES-8153SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,4×(with DTT)1ml/10ml/100ml 使用說明書1份【保存條件】建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃,有效期1年【概述】4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。【使用建議】1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。【注意事項】1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。
SDS lysis buffer【保存條件】 4℃保存,有效期 1 年。 【概述】 SDS 裂解液是一種較為強烈的細胞組織裂解液,可用于動物、植物的細胞或組織樣品, 也可以用于真菌或細菌樣品。SDS 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 PAGE、 Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。 【使用建議】 1.對于培養細胞樣品: a.取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的最終濃度為 1mM,或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 b.對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋 白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 植物細胞宜在冰上裂解 2-10min。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 對于懸浮細胞:離心收集細胞,輕輕渦旋或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照 6 孔板每 孔細胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解 10 分鐘。 對于細菌或酵母:對于 1ml 菌液或酵母液,離心去上清,如果有必要可以使用 PBS 洗滌一 次,充分去除液體后,輕輕渦旋或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入 100-200μl 裂 解液,輕輕渦旋或者彈擊管底以混勻,冰上裂解 2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果, 細菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液進行裂解。 裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞或者1ml的菌液或酵母液中的細菌和酵母量加入150μl 裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。每 100 萬動物細胞用 100μl 本產品裂解后獲得的上清,其蛋白濃度約為 2-4mg/ml,不同細胞所不同。 c.充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。2.對于組織樣品: a.把組織剪切成細小的碎片。 b.融解 SDS 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF,使 PMSF 的 最終濃度為 1mM,或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 c.按照每 20mg 組織加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添 加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。) d.用玻璃勻漿器勻漿,或使用組織研磨儀研磨,直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液 氮研磨,研磨充分后加入裂解液進行裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂 解 10 分鐘。 e.充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。每 20mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200μl 本裂解液裂解后獲得的上清,其蛋白濃 度約為 15-25mg/ml,不同狀態的不同組織有所不同。 f.如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋使樣品 裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻 漿器或研磨設備,缺點是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 2. 本產品長時間低溫存放可能會出現沉淀,可在 37oC 水浴約 10 分鐘以充分溶解沉淀。沉 淀完全溶解混勻后即可正常使用。 3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。 4. 該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
IP/Co-IP Cell Lysis Buffer【保存條件】 4oC 保存 【操作方法】 裂解貼壁細胞的方法(裂解前可加入相應蛋白酶/磷酸酶抑制劑): 1. 小心地從細胞中去除培養基。 用冰冷的 PBS 清洗一次。 2. 將冰冷 IP 細胞裂解緩沖液添加到細胞板中(6 孔板中每孔加入 200-400μl),并在冰上孵 育 5 分鐘,中途不間斷混勻。 3. 將裂解液轉移至微量離心管中,以約 13,000×g 的速度離心 10 分鐘,以在 4°C 下沉淀細 胞碎片。 4. 將上清液轉移到新的試管中,以測定蛋白濃度并進行進一步分析。 裂解懸浮細胞的方法(裂解前可加入相應蛋白酶/磷酸酶抑制劑): 1. 將細胞懸液以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細胞,丟棄上清液。 2. 用冰冷的 PBS 洗滌細胞一次,以 1,000×g 離心 5 分鐘以沉淀細胞。 3. 將冰冷的 IP 細胞裂解緩沖液添加到細胞沉淀中。每 50 mg 濕細胞沉淀(10:1 v / w)使 用 500μl 裂解緩沖液。 4. 在冰上孵育裂解物 5 分鐘。通過在 4°C 下以?13,000×g 離心 10 分鐘去除細胞碎片。 5. 將上清液轉移到新的試管中,以測定蛋白濃度并進行進一步分析。 【注意事項】 1. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。