4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液（DTT）使用說明書

【包裝規(guī)格】

【保存條件】

建議分裝凍存，避免反復(fù)凍融，-20℃，有效期1年

【概述】

4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質(zhì)在樣品制備步驟中免受熱降解，并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質(zhì)對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感，優(yōu)化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質(zhì)降解。SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋，消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。

上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料：藍色（溴酚藍），用于跟蹤電泳的進度；粉紅色（pyronin Y），用于在Western印跡過程中監(jiān)測蛋白質(zhì)向膜的轉(zhuǎn)移。

【使用建議】

1. 室溫解凍4×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。

2. 請按每30μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(4倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。

3. 混勻后，100℃水浴加熱5-10分鐘，使蛋白變性。

4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm離心2-5分鐘，取上清直接上樣電泳即可。

【注意事項】

1.     DTT對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2.     為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3.     聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右， 膠濃度為12%時，約在20kd左右，膠濃度為15%時，大概在10kd。請根據(jù)自己目標(biāo)條帶來判斷結(jié)果電泳時間。

4.     蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑，PH值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態(tài)下，溶液可能會呈現(xiàn)深棕色，不影響產(chǎn)品使用。

5.     一般而言，吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠（例如15%）中，吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。