青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合液（三抗，100X）

280.00元

高效Western封閉液

240.00元

Western高效封閉液貨號規(guī)格GF1815500 ml/瓶u 產(chǎn)品簡介在常規(guī)的Western blot和ELISA實驗中，需要用封閉試劑將膜或酶標板孔中的未被抗原或抗體占據(jù)的位點進行封閉，通常的封閉試劑有BSA，脫脂奶粉等，但是BSA中有少量的抗體殘留，導致抗原/抗體之間的交叉反應，從而產(chǎn)生高背景，雜帶多，或本底水平增高等影響。同樣脫脂奶粉中含有少量的生物素和堿性磷酸酶殘留，在使用生物素-親和素系統(tǒng)和堿性磷酸酶標記的二抗時，也會使得背景高或本底水平增高，脫脂奶粉中含有的酪蛋白和堿性磷酸酶殘留也使得其不適用于磷酸化蛋白的檢測。本產(chǎn)品采用化學合成的高分子聚合物作為核心封閉試劑，能夠避免BSA、脫脂奶粉等動物源性蛋白作為封閉試劑的缺陷，提高實驗結(jié)果的精確性，增加條帶清晰度；本封閉液不會干擾辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)標記二抗的檢測，同時也不影響基于生物素的檢測；本封閉劑不與蛋白產(chǎn)生非特異性結(jié)合，只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點，提高了抗體檢測靈敏度。封閉時間僅需十分鐘，大大縮短了實驗過程，節(jié)省了寶貴實驗時間。u 產(chǎn)品特色：? 即用型封閉液，可直接使用，4℃保質(zhì)兩年；? 封閉時間短，僅需10分鐘；? 減少高背景和非特異性免疫反應，增強條帶清晰度；? 適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統(tǒng)；? 不含磷酸鹽、疊氮鈉或硫柳汞類有毒防腐劑。u 運輸和保存條件：常溫運輸，4℃存儲，有效期兩年。u 操作步驟：1、 完成轉(zhuǎn)膜后，將膜移入到平皿或者其他適合的容器中。2、 根據(jù)膜的大小，在平皿或者其它適當容器中倒入一定體積的封閉液，確保封閉液能充分覆蓋膜即可。3、 置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育10分鐘左右。4、 封閉后的膜即可用于一抗孵育等后續(xù)Western Blot實驗。u 注意事項? 通常用于PVDF膜或NC膜的封閉時間為10分鐘。對于背景低的抗體，可以縮短到5分鐘，而對于一些背景非常高的抗體，可以嘗試將封閉時間延長為30-60分鐘。? 信號弱或無信號：可能是上樣量不足，轉(zhuǎn)膜效率低，抗體效價低、特異性差等原因造成；背景過高：可能是抗體使用量過多，試劑或儀器設(shè)備被污染等原因造成。? 由于沒有任何一種封閉液是適用于所有實驗體系的，因此對于一些特殊的實驗或抗體，請根據(jù)抗體說明書及實驗具體情況，選用合適類型的封閉液。? 本產(chǎn)品不含疊氮鈉、硫柳汞類防腐劑，但含安全性更高的醫(yī)療類防腐劑，使用時還需小心操作避免皮膚直接接觸。

青霉素-鏈霉素混合液（100X），雙抗

200.00元

青霉素-鏈霉素混合液（100X），雙抗

通用型無血清細胞凍存液（CellPreserve），不含DMSO

599.00元

通用型無血清細胞凍存液（CellPreserve），不含DMSO

通用型抗體稀釋液

790.00元

產(chǎn)品介紹：通用型抗體稀釋液是一種即用型的，適合于稀釋所有免疫抗體測定（Immunofluorescence, IHC, ELISA, WB）實驗中的抗體。該試劑可用于一抗或二抗的稀釋和配制，在4℃保存和使用不少于六個月。稀釋液中加入了多種抗體結(jié)合反應增強劑及穩(wěn)定劑，能夠增加抗體的溶解度和穩(wěn)定性，增強免疫反應，降低非特異的背景顏色，提高實驗的特異性和靈敏度。可反復使用，節(jié)約寶貴的抗體。試劑中不含有動物源的蛋白、磷酸鹽、疊氮鈉或硫柳汞類防腐劑，適合于所有類型抗體稀釋，包括HRP，AP標記的抗體。產(chǎn)品特色：1.即用型稀釋液，無需配制2.稀釋后的抗體可以使用長達6個月3.適用所有實驗的抗體稀釋（IF、IHC、ELISA、WB）4.含抗體結(jié)合反應增強劑、穩(wěn)定劑，效果更佳5.不含 BSA、脫脂奶粉等動物源蛋白6.不含磷酸鹽、疊氮鈉或硫柳汞類防腐劑 運輸和保存條件：常溫運輸，4℃存儲，有效期兩年。使用說明：1.根據(jù)抗體使用說明書，直接用本品對一抗或二抗進行適當倍數(shù)的稀釋。2.保存在抗體稀釋液中的抗體可回收于4℃保存，可反復使用多次，長達6 個月以上，直至不能達到理想結(jié)果后丟棄。注意事項：1.使用后請旋緊瓶蓋，防止溶液揮發(fā)或與空氣的物質(zhì)發(fā)生化學反應，并放回4℃保存。2.在進行抗體免疫反應前可以使用Genefist的無蛋白封閉液（貨號GF1813）進行封閉，能進一步提高條帶的清晰度，減少顯色后的高背景和雜帶的產(chǎn)生 。3.本品不含疊氮鈉或硫柳汞類防腐劑，但含安全性更高的防腐劑，還需小心操作避免皮膚直接接觸。4. 本試劑只能用于科研實驗，請勿用于臨床診斷和其它用途。

5X蛋白上樣緩沖液（還原型）

50.00元

產(chǎn)品簡介： SDS-PAGE 上樣緩沖液(SDS-PAGE Loading Buffer, 5X)，是一種經(jīng)過改良的以溴酚藍為染料，5 倍濃縮的蛋白上樣緩沖液，用于 SDS-PAGE 時蛋白樣品的上樣操作。本產(chǎn)品不含傳統(tǒng)的 β-巰基乙醇或 DTT，采用 TCEP作為還原劑，穩(wěn)定性更好、還原效果更高，并且無難聞氣味！由于含有變性劑，本產(chǎn)品不適用于非變性膠的電泳。 保存條件： -20℃保存，至少兩年有效。 使用說明： 1、 在 37℃水浴中溶解蛋白上樣緩沖液。 注意： Loading buffer 里含有大量甘油，有助于樣品沉淀至加樣孔底部，低溫下試劑組分在甘油里容易析出，使用前一定要確保蛋白上樣緩沖液充分溶解。 2、 按照每 4ul 蛋白樣品加入 1ul 上樣緩沖液的比例，混合蛋白樣品和上樣緩沖液。 3、 100℃或沸水浴加熱 5-10 分鐘，以充分變性蛋白。 注意：如果起始時細胞或組織的用量較大，基因組 DNA 含量較高，煮沸 5-10 分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體，此時需要延長煮沸時間，或者加入適量稀釋成 1X 的蛋白上樣緩沖液再煮 3-5 分鐘。充分煮沸可以使結(jié)合在基因組 DNA 上的蛋白充分釋放，同時會導致基因組 DNA 的部分斷裂，從而使粘稠感消失，這樣就不會影響后續(xù)的上樣操作。 4、 冷卻到室溫后，離心取上清上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內(nèi)，開始電泳。 5、 通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近，即可停止電泳。 注意事項： ? 由于含有變性劑，本品不適用于非變性膠的電泳 ? SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液(5X)必須完全溶解后再使用。 ? 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療。 ? 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

PAGE 快捷制備試劑盒(15%)

279.00元

RNAstore樣本保存液

1296.00元

儲存條件 室溫（15-25℃）可穩(wěn)定保存1年以上。低溫貯存可能會產(chǎn)生沉淀或晶體析出，用之前需37℃完全溶解沉淀。 產(chǎn)品介紹 RNAstore是一種液態(tài)的、無毒的組織保存試劑。它能迅速滲入組織細胞中，通過抑制RNase活性從而保護非冷凍細胞RNA于原位，使其更適合于組織基因表達譜的分析。獲得組織塊后，迅速浸泡在RNAstore中保存，而不會引起RNA的降解，這樣可以不必馬上處理樣本，也不必將樣本冷凍在液氮之中。RNAstore可廣泛應用于多種脊椎動物樣本。包括腦、心、腎、脾、肝、肺和胸腺。 推薦不同組織樣品的RNAstore使用量： 注意事項 1.RNAstore只能用于新鮮組織，在浸入RNAstore之前不能冷凍組織。 2.要求組織樣本任何一邊的最大厚度不能大于0.5 cm, 然后將組織塊放入到10倍體積的RNAstore中保存。如果組織樣品厚度過大，RNAstore滲入組織樣本中的速度將會減慢造成RNA降解。所以如果厚度超過0.5 cm需簡單切碎組織后再在RNAstore中貯存。 操作步驟 1.切割組織前估計加入RNAstore中的組織重量，并根據(jù)加入至少10倍體積組織的量確定RNAstore的使用量（舉例：組織100 mg需1 ml RNAstore） 2.切割組織后放入RNAstore中。如果組織樣本過大需剪切成任何一邊的最大厚度不能大于0.5 cm。 注意：為完全有效的保護組織樣本，該組織樣本應完全浸沒入RNAstore中并且組織樣本的任何一邊的最大厚度不應超過0.5 cm。 3.貯存于RNAstore中的樣品組織4℃可至少保存1個月、室溫1周和37℃ 1天。對于-20℃或-80℃長期保存，先將樣本在4℃條件下過夜?jié)B透，然后將組織從RNAstore中取出后放入-20℃或-80℃長期保存。樣本可隨后在室溫下解凍及再凍存，其RNA的質(zhì)和量都不會受影響。 注意：建議組織樣品在RNAstore中低溫保存 (4℃可至少保存1個月，-20℃或-80℃長期保存)，不建議37℃或室溫保存。凍存于-20℃或-80℃的組織可反復凍融至少20次不影響RNA提取。保存于RNAstore中的組織如果需要長途運輸，運輸過程中需要確保組織完全浸入RNAstore中。 4.從RNAstore中取出樣品就可以用RNA提取的試劑盒 (Trizol,RNAprepPure, RNAsimple)直接提取RNA。 其它應用 1.該試劑不適合于保存植物葉片，其表面的臘表皮使RNAstore很難完全滲入組織中。 2.對于組織培養(yǎng)細胞的操作，先沉淀細胞，用PBS洗一次，再用少量的PBS懸浮細胞，后加2倍體積的RNAstore保存。后續(xù)RNA的提取可以采用直接離心去除RNAstore后進行RNA提取，也可以不用去除RNAstore直接加入RNA提取裂解液進行直接提取。 離心法：因為RNAstore的介質(zhì)濃度比典型的細胞培養(yǎng)介質(zhì)的濃度高，因此用通常沉淀活細胞的離心力無法沉淀RNAstore中的細胞。離心沉淀細胞，去除RNAstore。（HeLa細胞大約需要3000×g，但其他細胞可能不能容忍這個速度，或者他們需要更大的離心力。） 直接提取法：通過向細胞混合物中加入10倍體積的RNA提取試劑來完成。 3.對于細菌的操作，先離心收集細菌，用PBS洗一次，再用少量的PBS懸浮細胞，加入2倍體積的RNAstore保存。后續(xù)RNA的提取參照組織細胞的提取步驟。大腸桿菌保存在RNAstore中4℃條件下1個月仍很完整，產(chǎn)生不降解的RNA。 4.對于全血中白細胞的保存，需將白細胞從紅細胞和血清中分離出來，并按組織培養(yǎng)細胞一樣處理后，白細胞便能有效地保存在RNAstore中。不要將全血、血漿或血清中的RNA保存在RNAstore中，因為它們蛋白含量過高，與RNAstore混合后易形成不溶的沉淀。

多糖多酚植物總RNA提取試劑盒

1184.00元

儲存條件 “裂解液RS” 和 “DNase I”，儲存于-20℃；其他試劑室溫（15-25℃）保存。 產(chǎn)品簡介 本試劑盒所含“裂解液 RS”，采用我司獨特的“SDS/抗氧化”的方式，可適用于廣泛的植物組織，包含草本植物與本本植物的葉片、具高粘性的多糖多酚類及種子胚乳的植物樣本；此提取方案，增加了額外步驟去除多酚和多糖，RNA 的提取總量更高。提取的總 RNA 純度高，基本沒有基因組、蛋白和其它雜質(zhì)的污染，可用于 PCR、Blot、分子克隆等多種下游實驗。 預防RNase污染，應注意以下幾方面 1.經(jīng)常更換新手套，因為皮膚帶有細菌，可能導致RNase污染;使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。 2.RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水清洗再滅菌，即可去除RNase。 3.配制溶液應使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。 使用前注意事項 1.裂解液 RS：使用前請于 50℃水浴將裂解液完全回溶，并添加 450ul 巰基乙醇；添加過巰基乙醇的裂解液 RS 繼續(xù)保存于-20℃（建議將添加過巰基乙醇的裂解液 RS 于無酶管分裝成小量，再保存于-20℃）。 2.溶液 BC：使用前請?zhí)砑?30ml 無水乙醇。 3.漂洗液 PW：使用前請?zhí)砑?64ml 無水乙醇。 4.為確保 RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在 RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。 5.鳳梨和蘭花推薦采用“裂解液 RL”（kit 產(chǎn)品目錄 TR02） 操作步驟 1.勻漿處理：50-100 mg 植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl 裂解液 RS（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），立即渦旋劇烈震蕩混勻，并于 56℃孵育 5-10 分鐘，每隔一段時間可翻轉(zhuǎn)混合離心管。 注意：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的 RNA 含量都不相同，請根據(jù)具體實驗情況選擇合適的植物材料的用量。 2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000rpm(~13,400×g)離心 5 min。 注意：溶液會呈現(xiàn)霧狀，為界面活性劑、蛋白質(zhì)、多糖及二次代謝物的沉淀物。 3.移取上清液至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min。 4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。 5.向溶液中加入 1.5 倍體積的溶液 BC（已添加無水乙醇）,以震蕩或移液器吸吐混合均勻。 注意：加入溶液 BC 后會形成絲狀沉淀物，不影響 RNA 提取。 6.移取混合液（連同沉淀物一起）至吸附柱 CR1（吸附柱 CR1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g) 離心1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：如果混合液體積大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育 15 分鐘。 注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重復操作步驟 10。 12.12,000rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附柱中殘余的乙醇。 注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。 13.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脫液體積不應少于 30μl，體積過小影響回收效率。為了增加產(chǎn)量，可將步驟 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1，放置2min，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。 附錄：從高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的樣本中提取 RNA 樟科植物樣本，在裂解后粘稠度高、移取困難，可直接于過濾柱中進行裂解，以減少移液器吸取的步驟。 1.將過濾柱 CS1 于冰上預冷，秤取不超過 30mg 的樣本組織，于液氮中迅速研磨，并將研磨的樣本直接轉(zhuǎn)移至預冷的過濾柱 CS1 里（過濾柱 CS1 放在收集管中）。 2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巰基乙醇)至過濾柱，于 60℃金屬浴孵育 10 分鐘。 3.12,000 rpm(~13,400×g)離心 5 min，將收集管中的濾液移取至新的 1.5ml 離心管，請避免吸取到沉淀物。 注意：有些樣本可能會堵塞過濾柱，可再次離心，或?qū)⒐苤惺Ｓ嗟牧呀庖阂浦列碌倪^濾柱 CS1 再次離心。 4.加入 1/3 倍體積的溶液 GP 至濾液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g)離心離心 5min，將上清液小心轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管，不要觸碰或移取固體沉淀。轉(zhuǎn)至上面“操作步驟 5”。

動物組織總RNA提取試劑盒

1104.00元

儲存條件 “DNase I（DNase I 凍干粉溶解于專用保存液）”，儲存于-20℃； 其他試劑室溫（15-25℃）保存。 產(chǎn)品簡介 動物組織總RNA提取試劑盒提供了快速簡單且有效的方法，可從各種動物組織中提取總RNA。本試劑盒采用離心管柱的方式，配合使用我司獨特的硫氰酸胍裂解液，使組織裂解及均質(zhì)化，并加入乙醇使RNA選擇性的與管柱膜結(jié)合，于操作過程中加入DNase Ⅰ以去除殘留的基因組DNA，經(jīng)過多次“洗滌及離心”的步驟去除污染雜質(zhì)，再以無核酸酶水回收結(jié)合在管柱膜上的RNA。若RNA小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,無法在此系統(tǒng)中被有效地回收。提取的總RNA純度高，基本沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。 預防RNase污染，應注意以下幾方面 1.經(jīng)常更換新手套，因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase污染。 2.使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。 3.RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。 4.配制溶液應使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。 使用前注意事項 1.裂解液 RL：使用前請?zhí)砑?300ul 巰基乙醇，添加過巰基乙醇的裂解液 4℃保存。 2.漂洗液 PW：使用前請?zhí)砑?64ml 無水乙醇。 3.為確保 RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在 RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。樣本保存在 RNAstore 試劑中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 個月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品質(zhì)與儲存在液氮中相同。 操作步驟 1.勻漿處理： 每 10-20 mg 組織加 300 μl 裂解液 RL（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），用研磨杵將組織徹底研磨（如組織較難徹底研磨，可選用電動或玻璃勻漿器）；隨后向勻漿液 中加入 590 μl RNase-Free ddH2O 和10 μl Proteinase K，混勻后 56℃處理 10-20 min。 注意：組織量一定不要超過 20 mg，否則將導致 RNA 得率和質(zhì)量下降。 2.將裂解混合液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1(過濾柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。 3.向濾液加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇，均勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀）。 4.將所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：將溶液和沉淀轉(zhuǎn)移至吸附柱 CR1 時，如果體積大于吸附柱容量，可以分次完成。 5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )離心離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱CR1 放回收集管中。 6.DNase Ⅰ降解。 每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。 注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 9.重復操作步驟 8。 10.12,000 rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。 注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。 11.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率；RNA 溶液請于-70℃保存。

培養(yǎng)細胞/細菌總RNA提取試劑盒

1024.00元

選配的試劑溶菌酶（50mg/ml）目錄號：GF0203-01，客戶自備，提取細菌總 RNA 時需配備儲存條件DNase I（為DNase I 凍干粉溶解于專用保存液），儲存于-20℃；其他試劑室溫（15-25℃）保存。產(chǎn)品簡介培養(yǎng)細胞/細菌總RNA提取試劑盒，提供了快速簡單且有效的方法，可從培養(yǎng)細胞和細菌中提取總RNA。本試劑盒采用離心管柱的方式，配合使用我司獨特的硫氰酸胍裂解液，使細胞或細菌裂解及均質(zhì)化，并加入乙醇使RNA選擇性的與管柱膜結(jié)合，于操作過程中加入DNase Ⅰ以去除殘留的基因組DNA，經(jīng)過多次“洗滌及離心”的步驟去除污染雜質(zhì)，再以無核酸酶水回收結(jié)合在管柱膜上的RNA。若RNA小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,無法在此系統(tǒng)中被有效地回收。提取的總RNA純度高，基本沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。預防RNase污染，應注意以下幾方面1.經(jīng)常更換新手套，因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase污染。2.使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。3.RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。4.配制溶液應使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。使用前注意事項1.裂解液 RL：使用前請?zhí)砑?300ul 巰基乙醇，添加過巰基乙醇的裂解液 4℃保存。2.漂洗液 PW：使用前請?zhí)砑?64ml 無水乙醇。3.為確保 RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在 RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。樣本保存在 RNAstore 試劑中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 個月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品質(zhì)與儲存在液氮中相同。操作步驟一、從培養(yǎng)細胞中提取總 RNA1.收集細胞a.懸浮細胞的收集（收集細胞數(shù)量請不要超過 1×107）：估計細胞數(shù)量，300×g 離心 5 min，將細胞收集到離心管中，仔細吸除所有培養(yǎng)基上清。b.單層貼壁細胞的收集（收集細胞數(shù)量請不要超過 1×107）：可直接在培養(yǎng)容器中裂解（容器直徑不超過10 cm），或者使用胰蛋白酶處理后離心收集細胞沉淀。（在搖瓶中培養(yǎng)的單層貼壁細胞通常采用胰蛋白酶處理的方法。）直接裂解法：確定細胞數(shù)量，徹底吸除細胞培養(yǎng)基上清，立即進行第 2 步裂解步驟。胰蛋白酶處理法：確定細胞數(shù)量，吸除培養(yǎng)基，用 PBS 洗滌細胞，吸除 PBS，向細胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的 PBS 處理細胞，當細胞脫離容器壁時，加入含有血清的培養(yǎng)基失活胰蛋白酶，將細胞溶液轉(zhuǎn)移至 RNase-Free 的離心管中，300×g 離心 5 min，收集細胞沉淀，仔細吸除所有上清。注意：收集細胞時一定要將細胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會導致裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結(jié)合，造成 RNA 的產(chǎn)量降低;請勿使用過多的樣本量，避免管柱杜塞而造成 RNA 的產(chǎn)量降低。2.裂解處理a.對于離心得到的細胞沉淀：輕彈離心管底部，使細胞沉淀松散，加入適量裂解液 RL（詳見下表，使用3.將所有溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。4.向濾液加入等體積 70%乙醇至裂解液中，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀）。5.將“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀）移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。注意：將溶液和沉淀轉(zhuǎn)移至吸附柱 CR1 時，如果體積大于吸附柱容量，可以分次完成。6.向吸附柱 CR1 加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )離心離心 1 min，丟棄濾液。7.DNase Ⅰ降解。每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。8.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。9.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。10.重復操作步驟 9。11.12,000 rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。12.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率；RNA 溶液請于-70℃保存。二、從細菌中提取總 RNA1.4℃12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min 收集菌體（收集菌體的最大量不超過 1×109），仔細去除所有培養(yǎng)基上清，以后的所有離心步驟均在室溫（20-25℃）進行。注意：如果培養(yǎng)基上清去除不完全，將對第二步中的細胞壁消化過程產(chǎn)生抑制。2.用含有溶菌酶的 100μl TE 緩沖液（客戶自己配制，配制方法見下表）徹底重懸菌體，孵育時間見下表。3.加入 350μl 裂解液 RL（使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇），渦旋振蕩混勻。 4.將裂解混合液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放入收集管)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。 5.向濾液中加入 250μl 無水乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀）。 6.將“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀）移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：將溶液和沉淀轉(zhuǎn)移至吸附柱 CR1 時，如果體積大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )離心離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。 注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重復操作步驟 10。 12.12,000 rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。 注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。 13.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率；RNA 溶液請于-70℃保存。

植物總RNA提取試劑盒

1184.00元

儲存條件 “裂解液RS” 和 “DNase I（DNase I 凍干粉溶解于專用保存液）”，儲存于-20℃。其他試劑室溫（15-25℃）保存。 產(chǎn)品簡介 由于植物的細胞結(jié)構(gòu)和代謝活性在物種、組織類型和發(fā)育階段之間可能存在顯著差異，因此沒有一種通用的裂解溶液或獨特的方法可以同樣適用于所有植物樣品。本試劑盒包含兩種可供選擇的裂解緩沖液系統(tǒng)：裂解緩沖液 RL（含硫氰酸胍）和裂解緩沖液 RS(含 SDS/抗氧化劑)，適用于各種植物和真菌樣品。“裂解液RL”含硫氰酸胍，此提取方案適用于大部分的植物組織，操作簡單快速，但它不適用于富含淀粉、多酚類及多糖類的樣本，因為裂解液RL加入上述樣本后，會使樣本變非常粘稠甚至凝固。 “裂解液RS”，采用我司獨特的“SDS/抗氧化”的方式，可適用于廣泛的植物組織，包含草本植物與本本植物的葉片、具高粘性的多糖多酚類及種子胚乳的植物樣本，此提取方案，增加了額外步驟去除多酚和多糖，RNA的提取總量更高。 本試劑盒提取的總 RNA 純度高，基本沒有基因組、蛋白和其它雜質(zhì)的污染，可用于 PCR、Blot、分子克隆等多種下游實驗。 預防RNase污染，應注意以下幾方面 1.經(jīng)常更換新手套，因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase污染。 2.使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。 3.RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。 4.配制溶液應使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。 使用前注意事項 1.裂解液 RL：使用前請?zhí)砑?300ul 巰基乙醇，添加過巰基乙醇的裂解液 4℃保存。 2.裂解液 RS：使用前請于 50℃水浴將裂解液完全回溶，并添加 450ul 巰基乙醇；添加過巰基乙醇的裂解液RS 繼續(xù)保存于-20℃（建議將添加過巰基乙醇的裂解液 RS 于無酶管分裝成小量，再保存于-20℃）。 3.溶液 BC：使用前請?zhí)砑?30ml 無水乙醇。 4.漂洗液 PW：使用前請向添加 64ml 無水乙醇。 5.為確保 RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在 RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。 6.鳳梨和蘭花推薦采用“裂解液 RL”。 操作步驟 一、裂解液 RL 操作步驟： 1.勻漿處理 50-100 mg 植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450ul RL（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），渦旋劇烈震蕩混勻，并于 56℃孵育 3 分鐘。 注意 1：在 56℃孵育 1-3 min 將有助于植物組織裂解，但是對于某些富含淀粉的樣品，請不要加熱處理，防止因淀粉引起的樣品膨脹現(xiàn)象。 注意 2：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的 RNA 含量都不相同，請根據(jù)具體實驗情況選擇合適的植物材料的用量。 2.將所有溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2-5 min，小心吸取收集管中的上清至 RNase-Free 的離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。 注意：由于裂解液較粘稠，所以將溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱時，可以剪去部分吸頭末端。 3.緩慢加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至“RNA 提取”步驟。 4.將所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g )離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：將溶液和沉淀轉(zhuǎn)移至吸附柱 CR1 時，如果體積大于吸附柱容量，可以分次完成。 5.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000 rpm (~13,400×g )離心離心 1 min，丟棄濾液,將吸附柱CR1 放回收集管中。 6.DNase Ⅰ降解。 每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 10ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 90 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。 注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 9.重復操作步驟 8。 10.12,000 rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余 的乙醇。 注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。 11.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率；RNA 溶液請于-70℃保存。 二、裂解液 RS 操作步驟 1.勻漿處理：50-100 mg 植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl 裂解液 RS（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），立即渦旋劇烈震蕩混勻，并于 56℃孵育 5-10 分鐘，每隔一段時間可翻轉(zhuǎn)混合離心管。 注意：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的 RNA 含量都不相同，請根據(jù)具體實驗情況選擇合適的植物材料的用量。 2.加入 150ul 的溶液 GP 至裂解液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000rpm(~13,400×g)離心 5 min。 注意：溶液會呈現(xiàn)霧狀，為界面活性劑、蛋白質(zhì)、多糖及二次代謝物的沉淀物。 3.移取上清液至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min。 4.小心吸取收集管中的上清至新的 RNase-Free 離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。 5.向溶液中加入 1.5 倍體積的溶液 BC（已添加無水乙醇）,以震蕩或移液器吸吐混合均勻。 注意：加入溶液 BC 后會形成絲狀沉淀物，不影響 RNA 提取。 6.移取混合液（連同沉淀物一起）至吸附柱 CR1（吸附柱 CR1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 注意：如果混合液體積大于吸附柱容量，可以分次完成。 7.向吸附柱 CR1 中加入 500ul 溶液 RW，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 8.DNase Ⅰ降解。 每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 2ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 82 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。 注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。 9.向吸附柱 CR1 中加入 500μl 溶液 RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 10.向吸附柱 CR1 中加入 600 μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。 11.重復操作步驟 10。 12.12,000rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱 CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附柱中殘余的乙醇。 注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。 如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。 13.將吸附柱 CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室 溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。 注意：洗脫液體積不應少于 30μl，體積過小影響回收效率。為了增加產(chǎn)量，可將步驟 13 得到的 RNA 溶液再加入吸附柱 CR1，放置 2min，12,000rpm(~13,400×g)離心 1min，得到 RNA 溶液。RNA 溶液-70℃中保存。 附錄：從高度黏稠性的富含多酚及多糖成分的樣本中提取 RNA 樟科植物樣本，在裂解后粘稠度高、移取困難，可直接于過濾柱中進行裂解，以減少移液器吸取的步驟。 1.將過濾柱 CS1 于冰上預冷，秤取不超過 30mg 的樣本組織，于液氮中迅速研磨，并將研磨的樣本直接轉(zhuǎn)移至預冷的過濾柱 CS1 里（過濾柱 CS1 放在收集管中）。 2.加入 600ul 裂解液 RS(已添加巰基乙醇)至過濾柱，于 60℃金屬浴孵育 10 分鐘。 3.12,000 rpm(~13,400×g)離心 5 min，將收集管中的濾液移取至新的 1.5ml 離心管，請避免吸取到沉淀物。 注意：有些樣本可能會堵塞過濾柱，可再次離心，或?qū)⒐苤惺Ｓ嗟牧呀庖阂浦列碌倪^濾柱 CS1 再次離 心。 4.加入 1/3 倍體積的溶液 GP 至濾液中，混合均勻，于冰上孵育 5 分鐘，12,000 rpm(~13,400×g)離心離心 5 min，將上清液小心轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管，不要觸碰或移取固體沉淀。轉(zhuǎn)至上面“操作步驟5”。

總RNA提取試劑盒

1024.00元

選配的試劑蛋白酶K（20mg/ml）目錄號：GF0202-01，客戶自備，提取動物組織總RNA時需配備 溶菌酶（50mg/ml）目錄號：GF0203-01，客戶自備，提取細菌總RNA 時需配備儲存條件DNase I溶液（DNase I 凍干粉溶解于專用保存液），儲存于-20℃，可反復凍融； 其他試劑室溫（15-25℃）保存。產(chǎn)品簡介總RNA提取試劑盒提供了快速簡單且有效的方法，可從各種動物組織、培養(yǎng)細胞及細菌、植物組織、 中提取總RNA。本試劑盒采用離心管柱的方式，配合使用我司獨特的硫氰酸胍裂解液，使組織或細胞裂解 及均質(zhì)化，并加入乙醇使RNA選擇性的與管柱膜結(jié)合，于操作過程中加入DNase Ⅰ以去除殘留的基因組DNA，經(jīng)過多次“洗滌及離心”的步驟去除污染雜質(zhì)，再以無核酸酶水回收結(jié)合在管柱膜上的RNA。若RNA 小于200nt,如5sRNA、tRNA和microRNA,無法在此系統(tǒng)中被有效地回收。提取的總RNA純度高，基本沒有DNA 和蛋白質(zhì)污染，可用于PCR、芯片分析、Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。本試劑盒同樣適用酵母，可以從酵母菌中提取總RNA,具體操作方法見“附錄Ⅰ”。本試劑盒也可用于將以其他方法提取的 RAN 進行clean up 或去除基因組DNA 污染，詳見“附錄Ⅱ”。預防RNase污染，應注意以下幾方面1. 經(jīng)常更換新手套，因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase污染。2. 使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。3. RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。4. 配制溶液應使用無RNase的水（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%(V/V)，高壓滅菌）。 使用前注意事項1. 使用前請向裂解液RL 添加 350ul 巰基乙醇，添加過巰基乙醇的裂解液 4℃保存。2. 使用前請向漂洗液PW 添加 64ml 無水乙醇。3. 為確保RNA 的品質(zhì)及產(chǎn)量，應盡量收取新鮮的動物組織進行 RNA 提取，或?qū)⒔M織立即以液氮冷凍，儲存于-70℃，組織亦可保存在RANstore 樣本保存液（目錄號：TR38）中。樣本保存在 RNAstore 試劑中，可于37℃存放 1 天、4℃存放 1 個月、-20℃永久保存，所提取的 RNA 品質(zhì)與儲存在液氮中相同。操作步驟一、從培養(yǎng)細胞中提取總 RNA1. 收集細胞a. 懸浮細胞的收集（收集細胞數(shù)量請不要超過 1×107）：估計細胞數(shù)量，300×g 離心 5 min，將細胞收集到離心管中，仔細吸除所有培養(yǎng)基上清。b. 單層貼壁細胞的收集（收集細胞數(shù)量請不要超過 1×107）：可直接在培養(yǎng)容器中裂解（容器直徑不超過 10 cm），或者使用胰蛋白酶處理后離心收集細胞沉淀。（在搖瓶中培養(yǎng)的單層貼壁細胞通常采用胰蛋白酶處理的方法。）? 直接裂解法：確定細胞數(shù)量，徹底吸除細胞培養(yǎng)基上清，立即進行第 2 步裂解步驟。? 胰蛋白酶處理法：確定細胞數(shù)量，吸除培養(yǎng)基，用 PBS 洗滌細胞，吸除 PBS，向細胞中加入含有0.10-0.25%胰蛋白酶的 PBS 處理細胞，當細胞脫離容器壁時，加入含有血清的培養(yǎng)基失活胰蛋白酶，將細胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-Free 的離心管中，300×g 離心 5 min，收集細胞沉淀，仔細吸除所有上清。注意：收集細胞時一定要將細胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會導致裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結(jié)合， 造成RNA 的產(chǎn)量降低;請勿使用過多的樣本量，避免管柱杜塞而造成 RNA 的產(chǎn)量降低。3. 將所有溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。 4. 向濾液加入等體積 70%乙醇至裂解液中，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至后面“RNA 提取步驟”。 二、從動物組織中提取總 RNA1. 勻漿處理：每 10-20 mg 組織加 300 μl 裂解液RL（使用前請先檢查是否已加入 β-巰基乙醇），用研磨杵將組織徹底研磨（如組織較難徹底研磨，可選用電動或玻璃勻漿器）；隨后向勻漿液 中加入 590 μl RNase-Free ddH2O 和10 μl Proteinase K（20mg/ml），混勻后 56℃處理 10-20 min。注意：組織量一定不要超過 20 mg，否則將導致RNA 得率和質(zhì)量下降。2. 將裂解混合液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1(過濾柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。 3. 向濾液加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇，均勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至后面“RNA 提取步驟”。 三、從細菌中提取總RNA1.4℃12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min 收集菌體（收集菌體的最大量不超過 1×109），仔細去除所有培養(yǎng)基上清，以后的所有離心步驟均在室溫（20-25℃）進行。注意：如果培養(yǎng)基上清去除不完全，將對第二步中的細胞壁消化過程產(chǎn)生抑制。2. 用含有溶菌酶的 100μl TE 緩沖液（客戶自己配制，配制方法見下表）徹底重懸菌體，孵育時間見下表。 TE 緩沖液中的溶菌酶終濃度孵育時間（室溫）G-細菌400 μg/ ml3-5 minG+細菌3 mg/ ml5-10 min3. 加入 350μl 裂解液 RL（使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇），渦旋振蕩混勻。 4. 將裂解混合液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱CS1 放入收集管)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。 5. 向濾液中加入 250μl 無水乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至后面“RNA 提取步驟”。 四、從植物組織中提取總 RNA本試劑盒不適用于富含淀粉、酚類和次級代謝物的植物組織（例如一些木本植物，胚乳或絲狀真菌的菌 絲體），因為 2-ME/裂解液在加入至樣本粉末后，會變固態(tài)或非常粘稠,此類植物組織請使用“多糖多酚植物總RNA 提取kit”（貨號 TR22）。 1. 勻漿處理50-100 mg 植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末，加入 450 μl RL（使用前請先檢查是否已加入β-巰基乙醇），渦旋劇烈震蕩混勻，并于 56℃孵育 3 分鐘。 注意 1：在 56℃孵育 1-3 min 將有助于植物組織裂解，但是對于某些富含淀粉的樣品，請不要加熱處理， 防止因淀粉引起的樣品膨脹現(xiàn)象。注意 2：由于植物多樣性非常豐富，而且同種植物的不同生長發(fā)育階段和不同組織的 RNA 含量都不相同， 請根據(jù)具體實驗情況選擇合適的植物材料的用量。2. 將所有溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1 上(過濾柱 CS1 放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2-5 min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free 的離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細胞碎片沉淀。注意：由于裂解液較粘稠，所以將溶液轉(zhuǎn)移至過濾柱時，可以剪去部分吸頭末端。3. 緩慢加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至“RNA 提取步驟”。 u RNA 提取步驟 此為續(xù)接樣本制備“一、二、三、四、五”后的RNA 提取操作步驟。1. 將前一步所得“裂解液/乙醇混合液”（含沉淀），移取至吸附柱 CR1 中（吸附柱 CR1 放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g )離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 CR1 放回收集管中。注意：將溶液和沉淀轉(zhuǎn)移至吸附柱CR1 時，如果體積大于吸附柱容量，可以分次完成。2. 向吸附柱CR1 中加入 500ul 溶液RW，12,000 rpm (~13,400×g )離心離心 1 min，丟棄濾液，將吸附柱CR1 放回收集管中。3. DNase Ⅰ降解。每一純化反應，請將 80 ul DNase 消化液與 2ul DNaseⅠ預先混合在新的離心管(輕彈或翻轉(zhuǎn)離心管以混合均勻，請勿震蕩)，將 82 ul “DNaseⅠ工作液”加入至吸附柱的膜中心，于室溫（25~28℃）孵育15 分鐘。注意：如同時操作多組樣本，請使用前現(xiàn)配新鮮的 DNaseⅠ工作液,請勿預先配制保存 DNaseⅠ工作液。4.向吸附柱CR1 中加入 500μl 溶液RW，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1 放回收集管中。5. 向吸附柱CR1 中加入 600μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm(~13,400×g) 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR1 放回收集管中。6. 重復操作步驟 5。7.12,000 rpm(~13,400×g)離心 3 min，將吸附柱CR1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱 CR1 在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT 等實驗。8. 將吸附柱CR1 轉(zhuǎn)入一個新的 RNase-Free 離心管中，加入 30-100 μl 無酶雙蒸水至吸附柱的膜中心，室溫靜置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 1 min，得到 RNA 溶液。注意：洗脫緩沖液體積不應少于 30 μl，體積過小影響回收效率；RNA 溶液請于-70℃保存。附錄Ⅰ：從酵母菌中提取總 RNA一、需要自備的試劑：a.溶壁酶（Lyticase）：目錄號 GF0210-01 b.山梨醇 buffer：用0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4二、操作步驟1. 取酵母細胞（最多不超過5×107cells），12,000 rpm(~13,400×g )離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。2. 酵母細胞壁的破除：酶法：向菌體中加入1ml山梨醇buffer，加入大約50U Lyticase（需自備，我司目錄號：GF0210-01）充分混勻，30℃孵育30min，300×g離心5 min，棄上清，收集沉淀。注意：以上為5×107酵母細胞的Lyticase用量，根據(jù)酵母的菌株和酵母細胞數(shù)量的不同，所用Lyticase 的濃度和孵育時間應該進行適當調(diào)整。3. 加入 350 μl 裂解液 RL（在使用前請加入 β-巰基乙醇），渦旋振蕩混勻，將裂解混合液轉(zhuǎn)移至過濾柱 CS1上(過濾柱 CS1 放入收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2min，收集濾液。4. 向濾液中加入 350μl 70%乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀），轉(zhuǎn)至上面“RNA 提取步驟”。 附錄Ⅱ：RNA Clean -Up 或基因組 DNA 去除。本試劑盒可用于將以其他方法提取的 RAN 進行clean up 或去除基因組DNA 污染。1. 將RNA 以無酶水調(diào)整體積至 100ul，加入 350ul 的裂解液 RL（使用前請加入β 巰基乙醇），混合均勻。2. 加入 250ul 的無水乙醇至裂解液中，混勻，轉(zhuǎn)至上面“RNA 提取步驟”。

多糖多酚植物基因組DNA提取試劑盒

544.00元

儲存條件 該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預 熱10 min，以溶解沉淀。 產(chǎn)品簡介及特點 本試劑盒采用特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和獨特的緩沖系統(tǒng)，能從多種植物組織中分離純化高質(zhì)量 基因組 DNA，獨特的沉淀溶液可以沉淀去除多糖多酚植物樣本中的蛋白質(zhì)、多糖以及酚類等雜質(zhì)。提取的基 因組 DNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。 使用本試劑盒純化的基因組 DNA 適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交、芯 片檢測、高通量測序等實驗。 簡便快捷：1 h內(nèi)即可獲得高純度的基因組DNA。 適用廣泛：適用于多種植物組織，尤其是多糖多酚植物。 安全無毒：無需酚/氯仿等有毒有機試劑。 超純高效：高效獲得高純度的DNA，可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。 注意事項 1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。 2.若溶液 GS1 或溶液 PBC 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 事前準備： 1.溶液 GS2 制備：加入 2ml 無菌水到 0.46g 溶液 GS2 濃縮液粉末中,旋渦 1 分鐘，50℃孵育至完全溶解，得 溶液 GS2。制備好的溶液 GS2 長期保存需要儲存在 4℃。 2.向溶液 PBC 中加入 30ml 無水乙醇，混勻，室溫保存。 3.向漂洗液 PW 中加入 64ml 無水乙醇，混勻，室溫保存。 4.在研磨組織之前解凍溶液 GS2;將水浴或金屬浴預熱至 65℃。 操作步驟使用前請先在溶液PBC和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。 1.取植物新鮮組織約 100 mg 或干重組織約 30 mg，加入液氮充分碾磨。 注意：使用超過推薦量的樣品可能堵塞吸附柱，降低回收率和質(zhì)量。 2.立即將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移至 1.5 ml 微量離心管中，并添加 360μ 溶液 GS1、40μl 制備好的溶液 GS2 和 25μl RNaseA 溶液，迅速渦旋混勻。 注意：不要預先混合這些溶液。 注意：為了獲得最佳產(chǎn)量，徹底研磨組織，不充分研磨的組織中的 DNA 可能無法被試劑接觸到;為了得到 完整的 DNA，新鮮組織應在液氮中迅速冷凍并存儲在-80℃中。 3.將離心管放在 65℃水浴 20 min，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。 4.加入 130 μl 溶液 PGP，渦旋振蕩 1 min，混勻后將離心管置于冰上靜置 5min，然后 12,000 rpm (~13,400×g ) 離心 5 min。 5.轉(zhuǎn)移上清至過濾柱 CS1 中（過濾柱 CS1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 1 min ，轉(zhuǎn)移濾 液至新的離心管中。 6.向濾液中加入 1.5 倍體積的“溶液 PBC（已添加無水乙醇）”，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，但不 影響后續(xù) DNA 的純化。 例如：對于 500ul 濾液，加入 750ul 溶液 PBC（已添加無水乙醇） 7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀“分次”轉(zhuǎn)移到吸附柱 CG1 中（吸附柱 CG1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g ) 離心 1 min，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400× g)離心 1 min，丟棄廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重復操作步驟 8。 10.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，棄收集管，然后將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)移 到新的離心管中，室溫晾干 5-10 min。 注意：乙醇殘留會抑制后續(xù)的酶反應，所以晾干時要確保乙醇揮發(fā)干凈，但也不要干燥太長時間，以免 難以洗脫 DNA。 11.在吸附柱 CG1 中加入 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 3-5 min，12,000rpm(~13,400×g)離心 2 min， 將溶液收集到離心管中。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影 響。若用 ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物 應保存在-20℃，以防 DNA 降解。 為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中， 室溫放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min。

植物基因組DNA提取試劑盒

544.00元

儲存條件 該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。 產(chǎn)品簡介及特點 本試劑盒采用特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和獨特的緩沖系統(tǒng)，能從多種植物組織中分離純化高質(zhì)量基因組 DNA，獨特的沉淀溶液可以沉淀去除多糖多酚植物樣本中的蛋白質(zhì)、多糖以及酚類等雜質(zhì)。提取的基因組 DNA 純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。 使用本試劑盒純化的基因組 DNA 適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交、芯片檢測、高通量測序等實驗。 簡便快捷：1 h內(nèi)即可獲得高純度的基因組DNA。 適用廣泛：適用于多種植物組織，包括多糖多酚植物。 安全無毒：無需酚/氯仿等有毒有機試劑。 超純高效：高效獲得高純度的DNA，可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。 注意事項 1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。 2.若溶液 GS1 或溶液 BC 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 事前準備： 1.溶液 GS2 制備：加入 2ml 無菌水到 0.46g 溶液 GS2 濃縮液粉末中,旋渦 1 分鐘，50℃孵育至完全溶解，得溶液 GS2。 制備好的溶液 GS2 長期保存需要儲存在 4℃。 2.向溶液 BC 中加入 30ml 無水乙醇，混勻，室溫保存。 3.向漂洗液 PW 中加入 64ml 無水乙醇，混勻，室溫保存。 4.在研磨組織之前解凍溶液 GS2;將水浴或金屬浴預熱至 65℃。 操作步驟 使用前請先在溶液BC和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。 1.取植物新鮮組織約 100 mg 或干重組織約 30 mg，加入液氮充分碾磨。 注意：使用超過推薦量的樣品可能堵塞吸附柱，降低回收率和質(zhì)量。 2.立即將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移至 1.5 ml 微量離心管中，并添加 360μ 溶液 GS1、40μl 制備好的溶液 GS2和 25μl RNaseA 溶液，迅速渦旋混勻。 注意：不要預先混合這些溶液。 注意：為了獲得最佳產(chǎn)量，徹底研磨組織，不充分研磨的組織中的 DNA 可能無法被試劑接觸到;為了得到完整的 DNA，新鮮組織應在液氮中迅速冷凍并存儲在-80℃中。 3.將離心管放在 65℃水浴 20 min，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。 4.加入 130 μl 溶液 GP，渦旋振蕩 1 min，混勻后將離心管置于冰上靜置 5min，然后 12,000 rpm (~13,400×g )離心 5 min。 5.轉(zhuǎn)移上清至過濾柱 CS1 中（過濾柱 CS1 放在收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 1 min ，轉(zhuǎn)移濾液至新的離心管中。 6.向濾液中加入 1.5 倍體積的“溶液 BC（已添加無水乙醇）”，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響后續(xù) DNA 的純化。 例如：對于 500ul 濾液，加入 750ul 溶液 BC（已添加無水乙醇） 7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀“分次”轉(zhuǎn)移到吸附柱 CG1 中（吸附柱 CG1 放在收集管中），12,000 rpm(~13,400×g ) 離心 1 min，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 1 min，丟棄廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重復操作步驟 8。 10.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，棄收集管，然后將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)移到新的離心管中，室溫晾干 5-10 min。 注意：乙醇殘留會抑制后續(xù)的酶反應，所以晾干時要確保乙醇揮發(fā)干凈，但也不要干燥太長時間，以免難以洗脫 DNA。 11.在吸附柱 CG1 中加入 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 3-5 min，12,000rpm(~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用 ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。 為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中，室溫放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min。

酵母基因組DNA提取試劑盒

384.00元

選配試劑RNase A (100 mg/ml)目錄號：GF020-01儲存條件該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。產(chǎn)品簡介本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱，和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附 DNA，可有效去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物,用來提取酵母細胞中的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。菌體濃度檢測可采用分光光度計或平板培養(yǎng)法檢測菌體量，一般對于釀酒酵母，OD600值為1.0時，相當于1-2×107cells / ml。注意事項1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。3.所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。需要自備的試劑1.溶壁酶 Lyticase（目錄號：GF0210-01）2.山梨醇 buffer：用0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4操作步驟 使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。 1.取酵母細胞（最多不超過5×107 cells），12,000 rpm(~13,400×g )離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。 2.酵母細胞壁的破除： 酶法：向菌體中加入600 μl山梨醇buffer，加入大約200 U Lyticase（客戶自備，目錄號：GF1203-01），充分混勻。30℃處理30 min。4000 rpm(~1500×g)離心10 min，棄上清，收集沉淀。 注意：以上為5×107酵母細胞的Lyticase用量，根據(jù)酵母的菌株和酵母細胞數(shù)量的不同，所用Lyticase的濃度和孵育時間應該進行適當調(diào)整。 3. 向沉淀中加入200 μl溶液GA重懸沉淀，充分混勻。 如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：GF020-01），振蕩15 sec，室溫放置5 min。 4.加入20 μl Proteinase K溶液，混勻。 5.加入200 μl溶液BG，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取DNA量少和提取的DNA不純。 6.加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放回收集管中。 8.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 注意：這一步驟對于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。 9.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 10.重復操作步驟 9。 11.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。 12.將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。 注意：洗脫液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用 ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。

細菌基因組DNA提取試劑盒

336.00元

選配試劑RNase A (100 mg/ml)目錄號：GF0201-01；溶菌酶溶液（50 mg/ml）目錄號：GF0203-01儲存條件該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。產(chǎn)品簡介及特點本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱，和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附 DNA，可有效去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物,用來提取細菌的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。提取得率材料 提取量 DNA 得率細菌培養(yǎng)液 106 -108 cells 5-20ug注意事項1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。3.所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。操作步驟使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。1.取細菌培養(yǎng)液1-5 ml，10,000 rpm(~11,500×g)離心1 min，盡量吸凈上清。2.向菌體沉淀中加入200 μl溶液GA，振蕩至菌體徹底懸浮。注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第2步驟，加入溶菌酶溶液進行破壁處理，具體方法為：加入110 μl溶菌酶緩沖液（20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70 μl溶菌酶溶液（50 mg/ml，客戶自備，目錄號：RT401），37 ℃處理30min以上。 如果需要去除RNA，可加入4 μlRNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：GF1202-01），振蕩15 sec，室溫放置5 min。 3.向管中加入20μl Proteinase K溶液，混勻。 4.加入200 μl溶液BG，振蕩15 sec，70 ℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。 5.加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放回收集管中。 7.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 注意：這一步驟對于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。 8.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。 9.重復操作步驟 8。 10.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。 11.將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。 注意：洗脫液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。 若用 ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。

血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒

1200.00元

血液/細胞/組織基因組 DNA 純化試劑盒 產(chǎn)品組成 GF304-02 GF304-03 (50 preps) (200 preps) 溶液 GA (Buffer GA) 15 ml 60 ml 溶液 BG (Buffer BG) 30ml 120ml 蛋白酶 K (20mg/ml) 1.1ml 4*1.1ml 漂洗液 PW (Buffer PW) 16ml（使用前請先加入 64ml 無水乙醇） 64ml（使用前請先加入 256ml 無水乙醇） 洗脫緩沖液 TB (Buffer TB) 15 ml 60 ml 吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1) 50 個 200 個 收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) 50 個 200 個 選配試劑紅細胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 貨號：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 貨號：GF0201-01) 儲存條件該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預 熱10 min，以溶解沉淀。 產(chǎn)品簡介及特點本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA 的離心吸附柱，和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附DNA，可有 效去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物,用來提取多種細胞中的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。根據(jù)不同的樣本量和樣本類型，可以提取的DNA 產(chǎn)量范圍為 1-40ug。 使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。 注意事項 1. 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA 片段較小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 3. 所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。操作步驟 使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。1.處理材料a. 如提取材料為血液，可直接使用 200μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 補足；注意：如需處理更大體積血液，如 300μl-1 ml，應按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 紅細胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置 5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000 rpm(~11,500×g)離心 1 min（若離心機最高轉(zhuǎn)速不允許，可 3000 rpm(~3,400×g)離心5 min），吸去上清，留下白細胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振蕩至徹底混勻。 紅細胞裂解液本公司另外有售（貨號：GF1201-01），可根據(jù)需要來決定購買。 b. 如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量 5- 20μl，可加溶液 GA 補足 200 μl 后進行下面的裂解步驟。c. 貼壁培養(yǎng)的細胞應先處理為細胞懸液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 溶液GA，振蕩至徹底懸浮。d. 動物組織（脾組織用量應少 10 mg）應先打碎處理為細胞懸液，然后 10,000rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 緩沖液 GA，振蕩至徹底懸浮。注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：GF0201-01）， 振蕩 15 sec，室溫放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混勻。 a.提取血液基因組時，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進行下一步。 b.提取細胞基因組時，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進行下一步。 c.提取組織基因組時，加入 Proteinase K 混勻后，在 56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進行下一步驟。注意：不同組織裂解時間不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化過夜），每小時顛倒混合樣品 2-3次，用水浴振蕩器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG，充分顛倒混勻，70℃放置 10 min,溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入溶液 BG 時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時會消失,不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不純。當血液體積≤200μl 且沒有采用紅細胞裂解處理，或是樣本儲存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒有團塊等沉淀。4. 加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。注意：這一步驟對于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重復操作步驟 7。9. 將吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、 PCR 等）實驗。10. 將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。注意：洗脫液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。

血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒

273.00元

血液/細胞/組織基因組 DNA 純化試劑盒 產(chǎn)品組成 GF304-02 GF304-03 (50 preps) (200 preps) 溶液 GA (Buffer GA) 15 ml 60 ml 溶液 BG (Buffer BG) 30ml 120ml 蛋白酶 K (20mg/ml) 1.1ml 4*1.1ml 漂洗液 PW (Buffer PW) 16ml（使用前請先加入 64ml 無水乙醇） 64ml（使用前請先加入 256ml 無水乙醇） 洗脫緩沖液 TB (Buffer TB) 15 ml 60 ml 吸附柱 CG1 (Spin Columns CG1) 50 個 200 個 收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) 50 個 200 個 選配試劑紅細胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 貨號：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 貨號：GF0201-01) 儲存條件該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保 存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預 熱10 min，以溶解沉淀。 產(chǎn)品簡介及特點本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA 的離心吸附柱，和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附DNA，可有 效去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物,用來提取多種細胞中的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。根據(jù)不同的樣本量和樣本類型，可以提取的DNA 產(chǎn)量范圍為 1-40ug。 使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。 注意事項 1. 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA 片段較小且提取量也下降。2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 3. 所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。操作步驟 使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。1.處理材料a. 如提取材料為血液，可直接使用 200μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 補足；注意：如需處理更大體積血液，如 300μl-1 ml，應按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 紅細胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置 5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000 rpm(~11,500×g)離心 1 min（若離心機最高轉(zhuǎn)速不允許，可 3000 rpm(~3,400×g)離心5 min），吸去上清，留下白細胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振蕩至徹底混勻。 紅細胞裂解液本公司另外有售（貨號：GF1201-01），可根據(jù)需要來決定購買。 b. 如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量 5- 20μl，可加溶液 GA 補足 200 μl 后進行下面的裂解步驟。c. 貼壁培養(yǎng)的細胞應先處理為細胞懸液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 溶液GA，振蕩至徹底懸浮。d. 動物組織（脾組織用量應少 10 mg）應先打碎處理為細胞懸液，然后 10,000rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 緩沖液 GA，振蕩至徹底懸浮。注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：GF0201-01）， 振蕩 15 sec，室溫放置 5 min。2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混勻。 a.提取血液基因組時，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進行下一步。 b.提取細胞基因組時，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進行下一步。 c.提取組織基因組時，加入 Proteinase K 混勻后，在 56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進行下一步驟。注意：不同組織裂解時間不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化過夜），每小時顛倒混合樣品 2-3次，用水浴振蕩器也可。3. 加入 200ul 溶液 BG，充分顛倒混勻，70℃放置 10 min,溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入溶液 BG 時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時會消失,不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不純。當血液體積≤200μl 且沒有采用紅細胞裂解處理，或是樣本儲存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒有團塊等沉淀。4. 加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放回收集管中。 6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。注意：這一步驟對于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放入收集管中。 8. 重復操作步驟 7。9. 將吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、 PCR 等）實驗。10. 將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。注意：洗脫液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。

通用型DNA純化回收試劑盒

944.00元

儲存條件該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。產(chǎn)品簡介及特性本試劑盒采用獨特的緩沖液體系和離心吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段，又能用于直接純化PCR產(chǎn)物，滿足多種實驗需要。整個純化過程可在15分鐘完成、不需進行苯酚萃取及酒精沉淀、純化的DNA無鹽類或大分子的污染。如果回收前DNA量為1-5ug，建議選用超薄DNA產(chǎn)物純化試劑盒GF203或超薄瓊脂糖凝膠回收試劑盒DF208，推薦洗脫液體積20-50ul。a.使用相同的溶液，可進行三種不同的應用（PCR 產(chǎn)物純化、DNA 產(chǎn)物純化、膠體回收）。b.每一離心管柱可處理達 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反應產(chǎn)物，DNA 回收率可達 80%~95%。c.可用于以 TAE 或 TBE 緩沖液配制的瓊脂糖凝膠的 DNA 回收，DNA 回收率可達 60~90%。注意事項1.電泳時應使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。2.如下一步實驗要求較高，則應盡量使用 TAE 電泳緩沖液。3.切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷。4.洗脫緩沖液加量應根據(jù)回收前DNA量來決定：如回收前DNA只有1-5μg左右（推薦選用GF203或GF208超薄型試劑盒），加20-50μl洗脫液；如回收前有5-15μg左右DNA，加30-100μl洗脫緩沖液；如回收前有15-30μg左右DNA，加50-300μl洗脫緩沖液。5.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。6.對于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以適當?shù)脑黾游胶拖疵摰臅r間。操作步驟使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。一、從 PCR 反應液或酶切反應液中回收 DNA 1.完成 PCR 擴增或其他酶切反應操作后，移取反應混合液（含有預純化的 DNA）至干凈的離心管。 2.加入 3 倍體積的溶液 PC 至反應混合液中（如 50ul 反應混合液加入 150ul 的結(jié)合液）,震蕩混合均勻。 3.將吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室溫放置 2 min，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的懸液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意：若樣本體積超過 700ul，可分次加入并重復此步驟。 4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中，靜置 1 分鐘以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄懸液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。 5.重復操作步驟 4。 6.將吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘，將吸附柱開蓋置于室溫放置數(shù)分鐘，以去除、晾干殘余的漂洗液。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶切、PCR 等實驗 7.將吸附柱 CB1 置于一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意：洗脫體積不應小于 30 μl，體積過少影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有較大影響，若后續(xù)做測序，需使用 ddH2O 做洗脫液，并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應保存在-20°C，以防 DNA 降解。為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，將 DNA 溶液收集到離心管。 二、從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段 1.完成電泳后，將單一的目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量（如果凝膠重為 0.1 g，其體積可視為 100 μl）。 2.向膠塊中加入 2 倍體積（如果瓊脂糖凝膠濃度＞2%，則加入 3 倍體積）的溶液 PC，60℃水浴孵育 5-15 min或更久，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，直至膠塊充分溶解（若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊）。 注意：膠塊完全溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結(jié)合 DNA 的能力較強。 3.將吸附柱放入收集管中，移取上一步溶膠液至吸附柱，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。 注意：若樣本體積超過 700ul，可分次加入并重復此步驟。 4.可選步驟：向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中（此步驟可去除殘余的瓊脂糖凝膠，以避免純化的 DNA 進行酶切反應時出現(xiàn)抑制現(xiàn)象）。 5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液，靜置 1 分鐘以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。 6.重復操作步驟 5。 7.將吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘，將吸附柱開蓋置于室溫放置數(shù)分鐘，以去除、晾干殘余的漂洗液。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶切、PCR 等實驗。 8.將吸附柱 CB1 置于一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫液 TB，靜置 2 分鐘，室溫放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min 收集 DNA 溶液。 注意：洗脫體積不應小于 30 μl，體積過少影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有較大影響，若后續(xù)做測序，需使用 ddH2O 做洗脫液，并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，將 DNA 溶液收集到離心管。