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試劑盒
生化試劑盒，elisa試劑盒，質粒提取類試劑盒
動物組織/細胞總RNA提取試劑盒（單柱法）100T
基本售價：1080.00元
產品介紹本試劑盒可以快速地從動物細胞中提取總 RNA。其提取的總 RNA 純度高（存在基因組 DNA），無蛋白質及其它雜質污染，可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。本產品僅供科研使用，請勿用于醫藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RLT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇的 Buffer RLT 可 4℃放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩定 12 個月。需要額外準備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規購買商業化商品即為 14.3 M)? 70%乙醇：RNase-free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無 RNase 酶的 1.5ml 離心管? 無 RNase 酶的槍頭? 干凈的手套? 高速離心機? 物理研磨設備開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RLT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現配現用），如 1 ml Buffer RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。配好的 Buffer RLT 可在 4℃維持穩定一個月。? Buffer RLT 在儲存時可能會形成沉淀， 如果有沉淀出現，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風險保證實驗穩定性。? RNA 在 Buffer RLT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含 RNase 的無酶離心管或玻璃器皿。操作步驟：1.請根據樣品種類進行以下步驟（1a 為動物細胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細胞：懸浮細胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細胞可通過直接裂解法（吸盡培養基留下貼壁細胞，待步驟 2 用 BufferRLT 裂解）或胰酶處理法（吸盡培養基留下貼壁細胞，用 PBS 清洗細胞，吸除 PBS后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細胞脫落，加入含有血清的培養基使胰酶失活后轉入 1.5ml 無酶離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細胞數量不要超過 1×107，收集細胞時一定要將細胞培養基去除干凈，否則會導致步驟 2 時細胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結合，導致 RNA 的產量降低。2b. 動物組織勻漿裂解處理：將 10mg-30mg 動物組織轉移入 1.5ml 無酶離心管中并加入 600μl Buffer RLT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機將動物組織徹底研磨勻漿。直接進行步驟 3.勻漿時間根據樣本裂解難易程度決定，亦可勻漿后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。2.樣品裂解：對于1a中使用直接裂解法的細胞應在培養皿或培養瓶中直接加入600μlBuffer RLT（使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇）進行細胞裂解，之后將裂解液全部吸入 1.5ml 無酶離心管中進行下一步操作。對于 1a 中使用胰酶處理法的細胞應在無酶離心管中加入 600μl Buffer RLT 渦旋 1min 裂解并進行下一步操作若細胞量少于 5×106 可使用 350μl Buffer RLT。若細胞量較大，可渦旋后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。3.將無酶離心管放入高速離心機以最大轉速(~13,400×g)離心 3min。收集上清入新的1.5ml 無酶離心管中，并加入 1 倍體積的 70%乙醇混勻。如 600μl 溶液則加入 600μl70%乙醇。配制 70%乙醇時請使用 RNase-free water。4.將步驟 3 混勻后的溶液轉移入 RNase-free 吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。5.向吸附柱中加入 700μl Buffer RW1（使用前請確認 Buffer RW1 是否按要求加入0.25 倍體積無水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。6.向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認 Buffer RPE 是否按要求加入 4倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。7.重復步驟 6 一次。8.倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱膜。9.將吸附柱套入新的無酶 1.5ml 離心管管中，并置于無酶的環境中開蓋靜置 5-10min至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。10. 向吸附柱膜正中央加入 50-100μl RNase-free Water，蓋上蓋子室溫靜置 3-5 min。后置于離心機中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應置于-80℃儲存。RNA 純度及濃度檢測純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的 RNA，OD260/OD280 讀數在 1.8-2.1之間，比值為 2.0 是高質量 RNA 的標志。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的 pH 值影響。同一個 RNA 樣品，假定在 10 mM Tris pH7.5 溶液中測出的 OD260/OD280 讀數 1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數則可能在 1.5-1.9 之間，但這并不表示 RNA 不純。濃度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free ddH2O 稀釋 n 倍，用 RNase-free ddH2O 將分光光度計調零，取稀釋液進行 OD260, OD280 測定，按照以下公式進行 RNA 濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數 n)×40
動物組織/細胞總RNA提取試劑盒（單柱法）50T
基本售價：600.00元
產品介紹本試劑盒可以快速地從動物細胞中提取總 RNA。其提取的總 RNA 純度高（存在基因組 DNA），無蛋白質及其它雜質污染，可用于 RT-PCR、qPCR、cDNA 合成、引物延伸、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、Slot Blot、Poly A 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆等多種下游實驗。本產品僅供科研使用，請勿用于醫藥、臨床治療、食品級化妝品等用途。存儲條件Buffer RLT 可室溫（15℃-25℃）干燥放置至少一年，加入 β-巰基乙醇的 Buffer RLT 可 4℃放置一個月；其他試劑室溫干燥保存可至少穩定 12 個月。需要額外準備的材料? 14.3 M β-巰基乙醇(β-ME) (常規購買商業化商品即為 14.3 M)? 70%乙醇：RNase-free 水配制? 無水乙醇（96%-100%）? 無 RNase 酶的 1.5ml 離心管? 無 RNase 酶的槍頭? 干凈的手套? 高速離心機? 物理研磨設備開始前注意事項 請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。? 操作前在 Buffer RLT 中加入 β-巰基乙醇（β-ME）至終濃度為 1%（建議現配現用），如 1 ml Buffer RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。配好的 Buffer RLT 可在 4℃維持穩定一個月。? Buffer RLT 在儲存時可能會形成沉淀， 如果有沉淀出現，請 37℃加熱溶解后室溫使用。? Buffer RW1 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 0.25 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? Buffer RPE 作為濃縮液提供，在第一次使用前加入 4 倍體積的乙醇（96-100％）以獲得工作溶液。? RNase-free 水中不含任何抑菌因子，室溫放置或操作時可能會引入細菌或真菌污染，使用時盡量注意，推薦開瓶后分裝保存以減少污染風險保證實驗穩定性。? RNA 在 Buffer RLT 中時不會被 RNase 降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含 RNase 的無酶離心管或玻璃器皿。操作步驟：1.請根據樣品種類進行以下步驟（1a 為動物細胞，1b 為動物組織）1a. 收集動物細胞：懸浮細胞可直接 300×g 離心 5min 并仔細吸除上清留沉淀待使用；單層貼壁細胞可通過直接裂解法（吸盡培養基留下貼壁細胞，待步驟 2 用 BufferRLT 裂解）或胰酶處理法（吸盡培養基留下貼壁細胞，用 PBS 清洗細胞，吸除 PBS后使用含 0.10%-0.25%胰酶的 PBS 使細胞脫落，加入含有血清的培養基使胰酶失活后轉入 1.5ml 無酶離心管中 300×g 離心 5min，吸除上清留沉淀待使用）注意：收集細胞數量不要超過 1×107，收集細胞時一定要將細胞培養基去除干凈，否則會導致步驟 2 時細胞裂解不完全，影響 RNA 與吸附柱的結合，導致 RNA 的產量降低。2b. 動物組織勻漿裂解處理：將 10mg-30mg 動物組織轉移入 1.5ml 無酶離心管中并加入 600μl Buffer RLT（動物組織量不要超過 30mg）使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇，使用研磨杵或電動研磨機將動物組織徹底研磨勻漿。直接進行步驟 3.勻漿時間根據樣本裂解難易程度決定，亦可勻漿后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。2.樣品裂解：對于1a中使用直接裂解法的細胞應在培養皿或培養瓶中直接加入600μlBuffer RLT（使用前請檢查 Buffer RLT 是否加入 β-巰基乙醇）進行細胞裂解，之后將裂解液全部吸入 1.5ml 無酶離心管中進行下一步操作。對于 1a 中使用胰酶處理法的細胞應在無酶離心管中加入 600μl Buffer RLT 渦旋 1min 裂解并進行下一步操作若細胞量少于 5×106 可使用 350μl Buffer RLT。若細胞量較大，可渦旋后靜置 3-5min 延長裂解時間（期間顛倒吹勻 2-3 次）。3.將無酶離心管放入高速離心機以最大轉速(~13,400×g)離心 3min。收集上清入新的1.5ml 無酶離心管中，并加入 1 倍體積的 70%乙醇混勻。如 600μl 溶液則加入 600μl70%乙醇。配制 70%乙醇時請使用 RNase-free water。4.將步驟 3 混勻后的溶液轉移入 RNase-free 吸附柱中并套上 2ml 收集管，≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。吸附柱最大上柱量為 700μl，若溶液過多可分多次上柱。后續操作若無特殊說明吸附柱均置于 2ml 收集管中。5.向吸附柱中加入 700μl Buffer RW1（使用前請確認 Buffer RW1 是否按要求加入0.25 倍體積無水乙醇）, ≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。6.向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE（使用前請確認 Buffer RPE 是否按要求加入 4倍體積無水乙醇），≥8000×g(≥10,000 rpm)離心 30s，棄廢液。7.重復步驟 6 一次。8.倒棄濾液，將吸附柱放入收集管中, 以最大轉速(~13,400×g)離心 3min 干燥柱膜。9.將吸附柱套入新的無酶 1.5ml 離心管管中，并置于無酶的環境中開蓋靜置 5-10min至乙醇晾干。若吸附柱中殘留乙醇將會對純化后的 RNA 的下游實驗造成影響。10. 向吸附柱膜正中央加入 50-100μl RNase-free Water，蓋上蓋子室溫靜置 3-5 min。后置于離心機中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm) 離心 3min 得到 RNA 溶液。RNA 洗脫體積不應少于 30μl，否則影響洗脫效率。洗脫后的 RNA 溶液應置于-80℃儲存。RNA 純度及濃度檢測純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的 RNA，OD260/OD280 讀數在 1.8-2.1之間，比值為 2.0 是高質量 RNA 的標志。OD260/OD280 讀數受測定所用溶液的 pH 值影響。同一個 RNA 樣品，假定在 10 mM Tris pH7.5 溶液中測出的 OD260/OD280 讀數 1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數則可能在 1.5-1.9 之間，但這并不表示 RNA 不純。濃度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free ddH2O 稀釋 n 倍，用 RNase-free ddH2O 將分光光度計調零，取稀釋液進行 OD260, OD280 測定，按照以下公式進行 RNA 濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數 n)×40
細菌基因組DNA提取試劑盒50T
基本售價：420.00元
操作步驟：1. 取200μl細菌菌液（最多不超過1×109cells）于無酶1.5ml離心管中。2. 10000×g離心1min或3000×g離心5min收集細菌沉淀。3. 加入200μl無菌PBS將細菌重懸。注意：為盡可能減少LB等細菌培養基對提取過程中的影響，可重復步驟2-3一次。4. 加入30μlLysozyme Solution至溶液中，充分渦旋混勻15-20s后37℃孵育15-30min。5. （可選）加入5μl RNaseASolution(20mg/ml，自備）至消化液中，顛倒混勻，室溫或37℃放置5-10min。6. 將所得溶液加入200μl Buffer BB并充分混勻，加入20μl ProteinaseK Solution后立即混勻，徹底混勻后置于70℃水浴中孵育10min。7. 將溶液從水浴中取出，并加入100μl異丙醇充分混勻。8. 于13000×g離心5min，離心結束后取上清溶液加入核酸吸附柱（提前套在2ml收集管中）。9. 以8000×g離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。10. 向吸附柱中加入500μl Buffer IRB，8000×g離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。11. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB（已加入無水乙醇），8000×g離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。12. 重復操作步驟11一次。13. 倒掉收集管中的廢液后將吸附柱再次套入收集管中，最大轉速 (~13,400×g)離心2min以除盡Buffer WB。將吸附柱套入新的1.5ml無酶離心管中并置于室溫放置5-10min徹底晾干乙醇。注意：Buffer WB中的乙醇殘留會影響后續的酶反應實驗。14. 向吸附柱膜中間位置懸空滴加50-100μl BufferEB，室溫靜置2min后，最大轉速(~13,400×g)離心2min收集核酸溶液。丟棄柱子，蓋上EP管蓋子置于-20℃保存。注意：洗脫體積不應小于30μl，體積過少會影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。為了提高DNA的回收量，可將BufferEB加熱（約60℃）并洗脫兩次，可增加約15-20%得率。
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