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非常規(guī)試劑
非常規(guī)試劑
寡核苷酸退火緩沖液Annealing buffer, 1ml*5
基本售價(jià)：460.00元
Annealing buffer, 10×【保存條件】 -20 ℃保存，有效期 12 個(gè)月 【概述】 本品適用于小片段（5-500bp）單鏈 DNA 的雜交反應(yīng)，獲得更優(yōu)質(zhì)的雜交雙鏈 DNA 片段，如 shRNA、 gRNA載體等構(gòu)建。 【操作方法】 I．體系配制（如下 20 μl 體系為例） II. 退火條件 A. 水浴鍋或 Heat Block 1．在微管中混合等體積的等摩爾寡核苷酸。 2．將微管在 95°C 下孵育 5 分鐘。 3．讓微管緩慢冷卻至室溫(注：若水浴等水溫升至最高后加入，勿中途取出)。 B. PCR（熱循環(huán)）儀(可選擇簡(jiǎn)易步驟或進(jìn)階步驟的其中一種使用) 【注意事項(xiàng)】1. 如果每次的使用量很小，可以適當(dāng)分裝后再使用，以免污染。2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
寡核苷酸退火緩沖液Annealing buffer, 10×
基本售價(jià)：210.00元
Annealing buffer, 10× 【保存條件】 -20 ℃保存，有效期 12 個(gè)月 【概述】 本品適用于小片段（5-500bp）單鏈 DNA 的雜交反應(yīng)，獲得更優(yōu)質(zhì)的雜交雙鏈 DNA 片段，如 shRNA、 gRNA載體等構(gòu)建。 【操作方法】 I．體系配制（如下 20 μl 體系為例） II. 退火條件 A. 水浴鍋或 Heat Block 1．在微管中混合等體積的等摩爾寡核苷酸。 2．將微管在 95°C 下孵育 5 分鐘。 3．讓微管緩慢冷卻至室溫(注：若水浴等水溫升至最高后加入，勿中途取出)。 B. PCR（熱循環(huán)）儀(可選擇簡(jiǎn)易步驟或進(jìn)階步驟的其中一種使用) 【注意事項(xiàng)】1. 如果每次的使用量很小，可以適當(dāng)分裝后再使用，以免污染。2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
潮霉素B 50mg / ml (無菌)-5ml
基本售價(jià)：430.00元
Hygromycin B solution 50mg/ml 5ml 【保存條件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素 B 是一種氨基糖苷類抗生素，可通過抑制蛋白質(zhì)合成來對(duì)抗細(xì)菌，真菌和高級(jí)真核生物。潮霉素 B 最初是作為抗蠕蟲藥開發(fā)的，在研究實(shí)驗(yàn)室中主要用于選擇和維持帶有潮霉素抗性基因的細(xì)胞。 【操作方法】 1. 常用篩選濃度 注意：潮霉素 B 用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化， 推薦使用濃度為 50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（ kill curve），即劑量 反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。 一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞 50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞 20-200μg/mL；真菌 300-1000μg/mL。 2. 殺滅曲線的建立 注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度， 可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇 5 個(gè)濃度。 1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照 20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2 培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于 需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。 2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定 50，100，250，500，750， 1000μg/mL。先用去離子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例將母液稀釋到 5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相 應(yīng)濃度的工作液。 3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。 4）接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養(yǎng)基。 5）按照固定的周期（如每 2 天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天 數(shù)（通常是 7-10 天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選 1）轉(zhuǎn)染 48h 后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素 B 篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。 注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果最好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較 好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過 25%。 2）每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。 3）篩選 7 天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這 取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。 4）挑取并轉(zhuǎn)移 5-10 個(gè)抗性克隆于 35mm 細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng) 7 天。 5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。 【注意事項(xiàng)】 1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 2. 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請(qǐng)小心操作。
pH計(jì)電極保護(hù)液
基本售價(jià)：120.00元
Electrode protection Solution 【保存條件】 室溫保存，有效期 1 年 【概述】 本產(chǎn)品為 pH 電極的浸泡液，用于電極保護(hù)，大大降低電極損耗，提高電極使用壽命。 【注意事項(xiàng)】 1. 該產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 2. 為了您的安全與健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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