RIPA裂解液（高強(qiáng)度）使用說明書

【包裝規(guī)格】

【保存條件】

-20℃保存，有效期1年，頻繁使用可放置4℃保存。

【概述】

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP和ELISA等。
      RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為高強(qiáng)度、中強(qiáng)度、低強(qiáng)度三類。請(qǐng)根據(jù)不同需求選擇不同強(qiáng)度RIPA裂解液。

【使用建議】

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。根據(jù)使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。混勻備用（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1. 樣品前處理：

a)  對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b) 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)  對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2. 后處理：將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事項(xiàng)】

1.     為了您的安全與健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2.     本產(chǎn)品長(zhǎng)時(shí)間低溫存放可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，可在37oC水浴約10分鐘以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。

3.     為保證最佳的使用效果，請(qǐng)盡量避免過多的反復(fù)凍融，可分裝后使用。

4.     裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

5.     RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

6.     該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。