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產(chǎn)品細(xì)節(jié)圖:
儲(chǔ)存條件
該試劑盒置于室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。第一次使用前將RNase A加入溶液P1中，混勻后置于2-8℃保存，可穩(wěn)定保存12個(gè)月以上。單獨(dú)包裝的RNase A 在室溫可穩(wěn)定保存12個(gè)月以上。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞，再通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司新型材料，高效、專一吸附DNA。由于增加了過濾柱，與普通的提取方法相比，本試劑盒可去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物，適用于提取1-5 ml過夜培養(yǎng)的大腸桿菌，質(zhì)粒提取得率和質(zhì)量與宿主菌的種類和培養(yǎng)條件，細(xì)胞的裂解，質(zhì)粒拷貝數(shù)，質(zhì)粒的穩(wěn)定性，抗生素等因素有關(guān)。
使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞及各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1.溶液 P1 在使用前先加入 RNase A（將試劑盒中提供的 RNase A 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。
2.使用前先檢查溶液 P2 和 P3 是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
3.注意不要直接接觸溶液 P2 和 P3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
4.所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心，速度為 12,000 rpm (~13,400×g)。
5.提取的質(zhì)粒量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。
操作步驟
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
1.取1-5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時(shí)可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中）。
2.向留有菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1 （請(qǐng)先檢查是否已加入RNase A），使用移液器吸吐或渦旋振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。
注意：如果有未徹底混勻的菌塊，會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
3.向離心管中加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。
注意：溫和地混合，不要?jiǎng)×艺鹗帲悦獯驍嗷蚪MDNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片斷。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時(shí)間不應(yīng)超過5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。
4.向離心管中加入250 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心10 min，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到過濾柱CS1（過濾柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5.12,000 rpm (~13,400×g )離心2 min，小心地將離心后收集管中得到的溶液轉(zhuǎn)移到吸附柱CP1中（吸附柱放入收集管中），（如果過濾柱中有殘余的液體說明步驟4吸取的上清中雜質(zhì)過多，可以延長(zhǎng)離心的時(shí)間； 如果離心后收集管底部有少量的沉淀，盡量的吸取上清）。
6.12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP1放入收集管中。
7.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g ) 離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP1放入收集管中。
8.重復(fù)操作步驟7。
9.將吸附柱CP1放入收集管中，12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP1開蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
10.將吸附柱CP1置于一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g) 離心2 min將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響，若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為了增加質(zhì)粒的回收率，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，室溫放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g) 離心2 min，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
低拷貝或大質(zhì)粒（ >10kb）提取
如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10 kb的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用5-10 ml過夜培養(yǎng)物，同時(shí)按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液TB應(yīng)在65-70℃水浴預(yù)熱，在吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难?/span>長(zhǎng)時(shí)間，以增加提取效率。其它步驟相同。
暫時(shí)沒有說明書
1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
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