DiD 高氯酸鹽 (細胞膜紅色熒光探針)  DiD perchlorate

別名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindodicarbovyanineperchlorate; DILC18(5); 'DID' OIL; DIIC18(5) OIL; 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetrame.indo-dicarbocyanine clo4; DIIC18(5); DID; DiD oil DiIC18(5) oil; CAS:127274-91-3;   

產品介紹：

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發，有著比DiI更長的激發波長和發射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。

DiD perchlorate
CAS號：127274-91-3
純度：＞95%
Ex/Em: 644/663nm 推薦濾光器（Filter）: XF47-Omega, 31023-Chroma
儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
溶解性：可溶于無水乙醇、DMSO和DMF，其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。發現較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。

使用方法
1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
注意：未使用的儲存液保存在-20 oC，避免反復凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
注意：工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。
2. 懸浮細胞染色
（1）懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。
（2）在37 ℃培養細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。
（3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養液。
（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。
3. 粘壁細胞的染色
（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。
（2）從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
（4）在37 ℃培養細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。
（5）吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，培養5～10分鐘，然后吸干培養基。
4. 顯微鏡檢測
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
5. 流式細胞儀的檢測
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1，FL2，FL3和FL4流式細胞儀檢測。