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產(chǎn)品細(xì)節(jié)圖:
來自溶組織梭菌的膠原酶在生物學(xué)研究中具有廣泛的用途,它可用于制備分離的細(xì)胞懸浮液。該產(chǎn)品適用于人類腫瘤、小鼠腎臟、人類成人和胎兒腦、肺和許多其他上皮組織的解聚。它還被證明可有效用于肝臟和腎臟灌注研究、胰腺消化、非實(shí)質(zhì)大鼠肝細(xì)胞的分離以及肝細(xì)胞的制備。 膠原酶已用于研究晚期糖基化終產(chǎn)物所需的動(dòng)脈組織的制備。該酶已經(jīng)測試可以約1 mg/mL的濃度釋放肝細(xì)胞。用于消化的濃度范圍是0.1至5 mg/mL。
該膠原酶產(chǎn)物是由溶組織梭菌所分泌的酶混合物組成,且不同的產(chǎn)物可通過在分泌酶中所發(fā)現(xiàn)的10-18種化合物的比例而進(jìn)行區(qū)分。 主要的成分是兩種膠原酶、梭菌蛋白酶和一種中性蛋白酶。 這些酶的協(xié)同作用可降解膠原蛋白及其他細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。膠原酶和中性蛋白酶的作用對(duì)于從組織中有效釋放細(xì)胞是必需的。 不同類型的膠原蛋白是膠原酶的天然底物。 每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化。 它被乙二醇-雙(β-氨基乙基醚)-N,NN′,N′-四乙酸,β-巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。
該產(chǎn)品相當(dāng)于最初的40%硫酸銨部分 Mandl, I., et al.,J. Clin.Invest., 32, 1323 (1953).溶液通常是在TESCA緩沖液(含有50mM TES、0.36mM氯化鈣,37℃時(shí)pH 7.4)中按1-2 mg/mL進(jìn)行制備。
一個(gè)膠原蛋白消化單元(CDU)從牛跟腱膠原蛋白中釋放的肽鏈量和1.0 μ亮氨酸,5小時(shí),pH7.4,37℃,在鈣離子存在下的茚三酮顏色相同。一個(gè) FALGPA水解單元每分鐘,25℃,水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一個(gè)中性蛋白酶單元水解酪蛋白,產(chǎn)生顏色和1.0 μmole 酪氨酸每5小時(shí),pH7.5,37℃下產(chǎn)生的相同。一個(gè)梭菌蛋白酶單元在DTT存在下,pH7.6,25℃,每分鐘水解1.0 μmole BAEE。
根據(jù)所提供的信息,該產(chǎn)品在-20°C下可穩(wěn)定保存一年。 在37℃、50℃和-20℃下FALGPA或蛋白酶的活性在30天內(nèi)不會(huì)有損失。如果進(jìn)行分裝(10mg / mL)并快速凍存在-20℃,則粗膠原酶的溶液是可以穩(wěn)定的。進(jìn)一步的反復(fù)凍融會(huì)損壞溶液。 該產(chǎn)品在置于冰上時(shí)可保持100%活性超過7小時(shí)。
膠原酶是一種可切割被稱為膠原蛋白的三螺旋蛋白的蛋白酶。存在有三種類型的組織膠原酶,而它們都屬于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)家族。從溶組織梭菌中獲得的膠原酶具有非常強(qiáng)的活性,因?yàn)樗稍诘椭?-10℃的溫度下從兩端對(duì)膠原蛋白進(jìn)行消化。粗膠原酶混合物含有兩種主要的酶類型,即膠原酶和梭菌蛋白酶。
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