Caspase-1活性檢測試劑盒
Caspase-1是唯一可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。
描述:細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩態具有十分重要的調節作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。其中Caspase-1是唯一可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡,并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。試劑盒測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA (Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基苯胺pNA,后者呈黃色在405 nm具有最大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-1的水解活性。反應體系100微升,試劑盒提供的試劑,除標準曲線外可進行50或100次樣品測定。
適用:測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。
組成與儲存:
1. 裂解緩沖液: 20 ml ,4 oC
2. 反應緩沖液: 10 ml ,4 oC
3. 2 mM Ac-YVAD-pNA底物: 0.5 ml,-20 oC避光
4. 10 mM pNA標準品: 0.5 ml,-20 oC避光
以上標出的量為100次檢測,50次檢測的試劑量減半。試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩定。
所需儀器:
酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。
工作波長:最大吸收波長405 nm,如不具備也可在400~450 nm范圍內測定。
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