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產品細節圖:
Hygromycin B Solution 100mg/ml 5ml
【保存條件】
4℃保存，一年有效
【概述】
潮霉素 B 是一種氨基糖苷類抗生素，可通過抑制蛋白質合成來對抗細菌，真菌和高級真核生物。潮霉素 B
最初是作為抗蠕蟲藥開發的，在研究實驗室中主要用于選擇和維持帶有潮霉素抗性基因的細胞。
【操作方法】
1. 常用篩選濃度
注意：潮霉素 B 用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，
推薦使用濃度為 50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（
kill curve），即劑量
反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細胞 50-500μg/mL；細菌/植物細胞 20-200μg/mL；真菌 300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最低濃度，
可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇 5 個濃度。
1）第一天：未轉化的細胞按照 20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2 培養過夜；注：對于
需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定 50，100，250，500，750，
1000μg/mL。先用去離子水或者 PBS buffer 按照 1:10 的比例將母液稀釋到 5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相
應濃度的工作液。
3）第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4）接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養基。
5）按照固定的周期（如每 2 天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天
數（通常是 7-10 天）內能夠殺死絕大多數細胞的最低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1）轉染 48h 后，用含有適當濃度的潮霉素 B 篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果最好。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較
好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過 25%。
2）每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養液。
3）篩選 7 天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這
取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
4）挑取并轉移 5-10 個抗性克隆于 35mm 細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養 7 天。
5）之后更換正常培養基培養即可。
【注意事項】
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。
1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影響因子：4.259
期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337
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