【保存條件】
-20℃避光保存,有效期 1 年。
【進(jìn)口原料】
ROCHE REF10236276001, LOT35273022(不同批次產(chǎn)品原料批次會(huì)有更新)
【概述】
DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽)是一種能夠與 DNA 中大部分 A、T 堿基相互結(jié) 合的熒光染料,常用于熒光顯微鏡觀測(cè)。因?yàn)?DAPI 可以透過完整的細(xì)胞膜,它可以用于活 細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。當(dāng) DAPI 與雙鏈 DNA 結(jié)合時(shí),最大吸收波長(zhǎng)為 358nm,最大發(fā)射 波長(zhǎng)為 461nm。DAPI 的發(fā)射光為藍(lán)色,且 DAPI 和綠色熒光蛋白 GFP 或 Texas Red 染劑(紅 色熒光染劑)的發(fā)射波長(zhǎng)僅有少部分重疊,可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒?染色。本產(chǎn)品母液為 DMF 溶解,后以 PBS 稀釋為 DAPI-PBS 溶液,濃度為 10μg/ml。經(jīng)過 濾處理,為即用型工作液,可直接用于固定細(xì)胞或組織樣品的細(xì)胞核染色。
【使用方法(僅供參考)】
1. 對(duì)于細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色, 則先進(jìn)行免疫熒光染色,染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行 DAPI 染色。如果不需要進(jìn)行其它染 色,則直接進(jìn)行后續(xù)的 DAPI 染色。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,加入少量 DAPI 染色液,覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞,至 少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液,混勻。
3. 室溫放置 5-10 分鐘。
4. 吸除 DAPI 染色液,用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次,每次 3-5 分鐘。
5. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)看到凋亡細(xì) 胞的細(xì)胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。
【注意事項(xiàng)】
1. DAPI 被普遍認(rèn)為具有致癌性,操作時(shí)應(yīng)戴手套,并避免交叉污染。
2. 本產(chǎn)品需避光,并盡量避免反復(fù)凍融。
3. 熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
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