EDTA decalcifying solution, pH

【保存條件】 

室溫保存，有效期 1 年 

【概述】 

一些組織內(nèi)含有骨質(zhì)或鈣化灶時，含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。這是因為鈣和 石蠟之間的密度不同，較難切除完整的切片。對含鈣組織最好固定之后，再進行脫鈣或二者 同時進行。然后進行下游的實驗，如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多， 脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及電解法脫鈣。 

EDTA 是一種相對較好的螯合脫鈣劑，對組織結構影響最小，可以較好的保存組織的某 些酶類，經(jīng) EDTA 脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太 慢，一般脫需要數(shù)周至數(shù)月。 

【使用建議】 

1. 骨組織脫鈣時，取材不易過厚，一般大約 5mm。 

2. 組織固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。 

3. 組織用蒸餾水洗清洗 3 次，每次 20min。 

4. 組織轉(zhuǎn)移至 20～30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中，脫鈣 10～30 天或更長時間。如果想加快 脫鈣速度，可以置于 37℃進行脫鈣。如果必要，更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣，多數(shù)組 織脫鈣 2 周～3 個月即可，每周更換一次，直至終點。亦可采用微波快速脫鈣法：微波爐設 在 200W 左右的檔位，每次加熱 5min，依據(jù)組織厚度和密度重復 3～5min，中間間隔 3～5min。 

5. 用蒸餾水沖洗數(shù)次。 

6. 常規(guī)脫水、包埋。 

【注意事項】 

1. 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣 10~30 天即可。

2. 適當加溫能加快脫鈣的速度，一般不應超過 37～40℃，溫度過高容易使骨組織造成松散 解體，尤其不可大于 60℃。 

3. 脫鈣應徹底，防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應控制在不影響組織切片的同時盡量縮短 脫鈣時間，以免脫鈣過長引起組織損害。 

4. 脫鈣用具避免使用金屬容器，盡量使用玻璃容器。 

5. 骨組織脫鈣應先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行，不應先脫鈣后固定，以便減少組織的 損傷程度。 

6. 每隔一段時間檢測一次脫鈣程度，避免脫鈣過度，脫鈣過度會增加組織的損傷程度，影響染色結果。 

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

8. 脫鈣終點的測定（物理法）：采用針刺、手掐、鉗夾等方法，當骨組織變軟或針刺時沒 有阻力感即可終止脫鈣。物理檢測法會對組織結構有一定的損害，盡量避免用力過大或反復檢測。