Evans Blue Stain Solution 0.5%

【保存條件】 

室溫保存，有效期 1 年 

【概述】 

伊文思藍(Evans Blue)又稱偶氮藍，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量為 960.80，CAS 號為 314-13-6。伊文思藍屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小和血漿白蛋白相近， 而且在血液中和血漿白蛋白有很高的親和力，因此在神經科學研究中常被用于示蹤觀察血腦 屏障(BBB)的完整性，也用于細胞染色區分活細胞、死細胞，亦可測定血容量。 

伊文思藍和臺盼藍都是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性和細胞是否存活。活 細胞不會被染成藍色，而死細胞會被染成淡藍色。伊文思藍染色后，通過顯微鏡下直接計數 或顯微鏡下拍照后計數，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量，其中 0.5%為最常用的 濃度。活細胞因有外排功能而無法被伊文思藍染色，因此可以通過此方法在顯微鏡下區分死 細胞和活細胞，但無法區分死亡和壞死。 

【使用建議】 

(一)血腦屏障通透性 

1. 取處理后的實驗動物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain Solution(0.5%)數秒至 1 分鐘， 小鼠眼睛、皮膚出現藍色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2. 腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，離心。 

3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育 18～24h。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上 清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4. 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。 5. 取上述溶液 1～2ml，用分光光度計測 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時測定已知不同梯度的 標準依文思藍的 OD 值，繪制標準曲線。根據標準曲線計算出待測待測樣品的依文思藍含 量。 

(二)活細胞染色 

1、取 100μl 重懸細胞到常規 1.5ml 或 0.5ml 離心管內，加入 100μl 伊文思藍染液輕輕混勻， 染色 3min(染色時間可適當延長，但不宜超過 10min)。 

2、吸取少量經過染色后的細胞，用血細胞計數板計數。通常如果要比較精確地進行定量， 每個細胞樣品至少數 500 個細胞，數出藍色細胞和細胞總數。細胞存活率計算公式如下: 細胞存 活率＝(細胞總數-藍色細胞數)/細胞總數×100% 

【注意事項】 

1. 伊文思藍對人體有輕微毒性，請小心防護。 

2. 細胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現象。 

3. 血腦屏障通透性實驗中，伊文思藍染色液注射量應根據不同動物以及動物的重量調整。 

4. 最好采用低溫冷凍離心機進行離心。 

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。