Hoechst33342 Stain Solution(1mg/ml)

【保存條件】 

-20℃避光保存，有效期 1 年。 

【概述】 

Hoechst 33342，也稱 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342。分子式為 C27H28N6O·3HCl·3H2O，分子量為 615.99，CAS Number 23491-52-3。 Hoechst 33342 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342 染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33342 也常用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的 DNA 染色。 Hoechst 33342 的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 346nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 460nm；Hoechst 33342 和雙 鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為 350nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 461nm。 本 Hoechst 33342 染色液濃度為 1mg/ml，可稀釋后用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色， 也可稀釋后用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 

【使用方法】 

使用前用生理鹽水或 PBS 將 Hoechst 33342 染色液稀釋 100 倍，即為工作液。

 A 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織： 

1. 對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色， 則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行 Hoechst 33342 染色。如果不需要進(jìn) 行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的 Hoechst 33342 染色。 

2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量 Hoechst 33342 工作液，覆蓋住樣品即可；對(duì)于懸浮 細(xì)胞，至少加入待染色樣品 3 倍體積的工作液，混勻。室溫放置 3-5 分鐘。 

3. 吸除 Hoechst 33342 染色液，用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 

4. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì) 胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 

B 對(duì)于活細(xì)胞或組織： 

1. 加入適當(dāng)量 Hoechst 33342 工作液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對(duì)于六孔板一個(gè) 孔需加入 1mL 工作液，對(duì)于 96 孔板一個(gè)孔需加入 100μL 工作液。 

2. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度下培養(yǎng) 20-30 分鐘。棄染色液，用 PBS 或培養(yǎng)液洗滌 2-3 次即可進(jìn)行熒光檢測(cè)。 

【效果圖】 

本產(chǎn)品用于活細(xì)胞染色效果參考圖：

圖 1.正常培養(yǎng)的 HeLa 細(xì)胞用本產(chǎn)品染色后的實(shí)拍效果圖。圖 A 為正常細(xì)胞 Hoehst 33342 的染色效果圖。圖 B 中除 了正常細(xì)胞外，還清晰可見呈現(xiàn)致密濃染的凋亡細(xì)胞。

【注意事項(xiàng)】 

1. Hoechst 33342 對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。 

2. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。 

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。