Hoechst33258 Stain Solution

【保存條件】 

-20℃避光保存，有效期 6 個月。 

【概述】

 Hoechst 33258，也稱 bisBenzimide H 33258 或 HOE 33258。分子式為 C25H24N6O·3HCl， 分子量為 533.88，CASNumber 23491-45-4。 Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33 258 染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258 也常用于普通的細胞核染色，或常規的 DNA 染色。 Hoechst 33258 的最大激發波長為 346nm，最大發射波長為 460nm；Hoechst 33258 和雙 鏈 DNA 結合后，最大激發波長為 352nm，最大發射波長為 461nm。 本 Hoechst 33258 染色液可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細 胞或組織的細胞核染色。 

【使用方法】 

該產品使用時應室溫解凍并充分搖勻。 

1. 對于固定的細胞或組織： 

a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色， 則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行 Hoechst 33258 染色。如果不需 要進行其它染色，則直接進行后續的 Hoechst 33258 染色。 

b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸 浮細胞，至少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液，混勻。室溫放置 3-5 分鐘。 

c. 吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細 胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 

2. 對于活細胞或培養的組織：

a. 加入適當量 Hoechst 33258 染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一 個孔需加入 1ml 染色液，對于 96 孔板一個孔需加入 100 微升染色液。 

b. 在適宜于細胞培養的溫度培養 20-30 分鐘。棄染色液，用 PBS 或培養液洗滌 2-3 次即可 進行熒光檢測。細胞發生凋亡時，在熒光顯微鏡下觀察會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 

【效果圖】 

本產品用于活細胞染色效果參考圖：

圖 A 為正常細胞 Hoehst 33258 的染色效果圖。圖 B 中除了正常細胞外，還清晰可見呈現致密濃染的凋亡細胞。

【注意事項】 

1. Hoechst 33258 對人體有害，請注意適當防護。 

2. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。 

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。